当代大学生实验课操作之养孩子系列-细胞传代培养

针对贴壁细胞：3-6传代

一.消化细胞

1.观察细胞是否达到可传代密度(70%及以上)，取出一盘处于对数期的细胞

2.用移液器吸走剩余的培养基，加入2ml PBS，略微摇晃后吸走PBS

3.轻轻晃匀，使充分与细胞接触，在37°C培养箱或室温3~5min

4.加入1ml0.2%-0.25%胰酶(视细胞而定),在显微镜下观察到细胞变大变圆，且晃动时可自由移动时，用大于等于1ml (与消化酶等量的)的含10%血清的培养基终止消化

5.用移液器充分吹打使细胞尽可能脱落，转移细胞悬液至15ml|离心管

6.在显微镜下观察，如有较多细胞剩余，则用1mlPBS洗

二.离心

将离心管配平后放入离心机，在1000rpm/min （视细胞而定）转速下离心5~8min

三.重悬

1.弃去离心管中的上清液至废液缸，弃液体时不可倒流，有细胞侧朝外

2.加入 2ml 培养基，用移液器抽吸混匀，得到均匀的细胞悬液

四.种回

1.取出2个半径10cm的培养皿，做好标记（细胞名称 代次 日期），加入所需体积培养基至培养皿中

2.各取1ml已混匀的细胞悬液至2个准备好的培养皿中，轻轻晃动使液体充满培养皿底部

3.用“8字摇匀法”摇匀后放回培养箱培养