单基因文章。基因KREMEN2上调预测结肠癌（cc）预后较差

2023-08-23 08:59 作者:275276 0人读过 | 我要投稿

背景：结肠癌（CC）是全球第五大常见癌症，对人类健康构成重大风险。尽管Kremen2可作为恶性肿瘤个体的预后指标，但其在评估结肠癌个体预后中的作用尚未得到证实。

方法：在这里，我们通过免疫组织化学 (IHC) 检查了 CC 组织和配对的邻近正常组织中 Kremen2 的蛋白表达，然后分析了癌症基因组图谱 (TCGA) 数据库中提供的临床和 RNA-seq 数据，以确认 Kremen2 之间的关系级别和 CC。此外，还检查了 Kremen2 mRNA 表达与浸润免疫细胞之间的关联。

结果：研究显示CC组织中Kremen2的mRNA表达量和蛋白水平较癌旁正常组织升高。根据 Kaplan-Meier 分析，CC 中 Kremen2 的高表达与总生存期和无进展生存期较差有关。临床相关分析强调，高水平的 Kremen2 表达与肿瘤进展，特别是淋巴结转移密切相关。Cox 回归分析强调 Kremen2 是 CC 的独立预后指标。生物信息学研究强调 Kremen2 可能与 CC 的免疫状态有关。

结论： Kremen2 升高可作为潜在的 CC 预后生物标志物。

结果

Kremen2 在结肠癌中过度表达

根据 TIMER 数据，我们观察到 Kremen2 mRNA 在多种肿瘤中过度表达，TCGA 数据分析显示，CC 组织中 Kremen2 mRNA 水平显着升高。我们分析了 113 个肿瘤组织和 46 个配对的邻近正常组织中的 IS，以验证 CC 中 Kremen2 蛋白的表达。使用非参数检验，我们观察到 CC 中的 Kremen2 蛋白表达显着高于邻近正常组织 ( p < 0.001)。

Kremen2在不同肿瘤中的mRNA表达基于TIMER数据库，COAD中的mRNA表达基于TCGA数据库。(A) Kremen2 mRNA 在不同种类肿瘤中的表达。(B)未配对比较：与邻近正常组织相比，COAD 组织中 Kremen2 mRNA 表达升高。(C)配对比较：与邻近正常组织相比，COAD 组织中 Kremen2 mRNA 表达升高。*：p < 0.05，**：p < 0.01，***：p < 0.001。

通过 IHC 分析 Kremen2 在结肠癌和癌旁正常组织中的蛋白表达。(A)邻近正常组织 InS = 0。(B)高分化 (G1)，肿瘤组织 InS = 0。(C)高分化 (G1)，肿瘤组织 InS = 1。(D)中度分化 (G2)，肿瘤组织InS = 2。(E)中度分化(G2)，肿瘤组织InS = 3。(F)肿瘤组织中Kremen2蛋白的IHC评分升高。放大倍数 × 200，比例尺 = 50 μm。InS：强度评分，IHC：免疫组织化学，CC：结肠癌。

Kremen2蛋白表达与CC个体临床病理特征的关系

根据年龄、性别、肿瘤部位、TNM分期、CEA、肿瘤大小、分化、周围神经侵犯、淋巴血管侵犯和MMR进行亚组分析，以确定Kremen2蛋白表达与临床病理参数的关联。与没有淋巴结转移的 CC 个体相比，有淋巴结转移的 CC 个体的 Kremen2 蛋白表达水平显着更高 ( p = 0.036)。此外，我们观察到 Kremen2 蛋白与 CC 患者的性别和年龄相关。女性患者 ( p = 0.025) 和年龄 <55 岁的患者 ( p= 0.013）往往具有较高的 Kremen2 蛋白表达。然而，CC 中 Kremen2 蛋白表达与其他临床病理参数之间没有显着相关性 ( p > 0.05)

Kremen2 mRNA表达与临床特征的关系

当我们基于 TCGA 检查 CC 患者的临床病理参数与 Kremen2 mRNA 表达之间的关系时，我们观察到高 Kremen2 mRNA 表达与肿瘤 N 分期（从 N0 到 N2 和从 N1 到 N2）相关（p = 0.005 , 0.012 ) 。就 T 阶段而言，从 T2 进展到 T3 与 Kremen2 mRNA 表达水平升高相关 ( p = 0.032)。然而，Kremen2 mRNA 表达与性别、年龄或 M 期无关

基于TCGA的CC患者Kremen2 mRNA表达与临床病理特征的关系显示 Kremen2 mRNA 与(A) N 期、(B) T 期、(C)性别、(D)年龄和(E) M 期的关系的箱线图。

CC 中高 Kremen2 表达与不良预后相关

采用 K-M 生存曲线来确定 Kremen2 表达与 CC 中生存的关联。根据 K-M 图，Kremen2 mRNA 表达升高的 CC 病例 OS 较短（TCGA，p = 0.043）和无进展生存期（TCGA，p = 0.041）。K-M 生存曲线还显示，高 Kremen2 蛋白表达与不良预后相关（IHC，p = 0.013）。随后，采用 ROC 曲线分析来分析 Kremen2 蛋白表达的预测价值，有望预测 CC 的预后价值。在 ROC 曲线上观察到 1 年、3 年和 5 年的曲线下面积得分（分别为 0.769、0.636 和 0.651）（图4D）。

Kremen2 高表达水平和低表达水平的 CC 患者的 Kaplan-Meier 生存曲线。(A) Kremen2 mRNA 表达差异的 CC 患者的 OS。(B) Kremen2 mRNA 表达差异的 CC 患者的无进展生存期。(C) Kremen2 蛋白表达差异的 CC 患者的 OS。(D) Kremen2 蛋白表达 1、3、5 年时的 AUC 评分。AUC，ROC 曲线下面积。

Kremen2蛋白表达是CC患者的独立预后因素

使用 TCGA 的临床数据，我们观察到年龄 ( p = 0.014)、T 分期 ( p = 0.007)、N 分期 ( p = 0.012) 和 M 分期 ( p < 0.001) 是预后的独立危险因素患有 CC 的个人。根据单变量分析结果，Kremen2 mRNA 高表达与不良预后密切相关（p = 0.001），而在多变量分析中则不相关（p = 0.107）。此外，单变量 Cox 回归分析显示 Kremen2 蛋白高表达与不良预后之间存在显着相关性 ( p = 0.017)。其他临床参数，包括 N 分期 ( p = 0.009)、M 分期 ( p = 0.000) 和周围神经侵犯 ( p = 0.018)，与不良预后相关。表3）。此外，多变量分析显示，Kremen2 蛋白高表达 ( p = 0.036) 和 M 期 ( p = 0.001) 与不良预后独立相关（表3）。

TCGA 中 CC 患者 OS 的单变量和多变量 Cox 回归分析。(A)单变量 Cox 分析。(B)多变量 Cox 分析。

Kremen2 mRNA水平与免疫细胞浸润水平的相关性

肿瘤浸润淋巴细胞可以独立反映癌症的生存情况。在此，我们评估了 TCGA-COAD 中 Kremen2 mRNA 表达与 22 种免疫细胞亚型浸润之间的联系。调节性T细胞（Treg）（p = 0.034）和活化的自然杀伤（NK）细胞（p = 0.020）是高表达组中浸润水平显着较高的免疫细胞。低表达组的CD4 +记忆静息 T 细胞浸润水平显着高于高表达组 ( p = 0.031)。根据相关性分析，CD8 + T细胞和活化的NK细胞浸润与Kremen2 mRNA表达呈正相关

Kremen2 mRNA 水平与免疫细胞浸润水平之间的关联分析。(A)高表达组和低表达组之间的免疫细胞；* p < 0.05。(B) CD8 T 细胞与 Kremen2 mRNA 水平之间的相关性。(C)活化的 NK 细胞与 Kremen2 mRNA 水平之间的相关性。

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