植株中磷的测定-上海液质检测平台

植物体内磷主要以有机磷如核酸、磷脂、植素等的形态存在于植物组织中，有机磷须经干灰化或湿灰化分解转变为无机正磷酸盐。溶液中磷一般用比色法测定。

湿灰化应用不同比例的HNO3、H2SO4、HCIO4的方法较为普遍。湿灰化法的消煮温度不会超过混合酸的沸点，灰分元素不会形成难溶的硅酸盐，而且当用H2SO4或HCIO4消煮时，可使SiO2充分脱水且使其吸附作用降至最低限度，不致造成灰分元素测定产生显著的负误差。但是由于试剂用量大，会带来污染的危险，试剂空白值大。当然加有HNO3的湿灰化法，则不能在消煮液中同时测定氮。

在干灰化法中，所用的温度有所不同。一般建议灰化温度不超过500℃，时间为2～8h。近年来，改进的干灰法中，添加一些"助灰化剂"，在灰化时通O2，添加KHSO4等，帮助灰化。干灰化添加试剂量少，污染的可能性比湿灰化小，而且简便易行。对于植物全磷的测定用H2SO4—H2O2消煮法，同时测定氮、磷和钾较为方便。总之，方法的选择应根据测定元素的类别、具体条件来决定。溶液中磷的测定，最常用的钼蓝比色法和钒钼黄比色法。当磷的含量高时，选用钒钼黄法为佳，反之则可用钼蓝法。

 H2SO4—H2O2消煮，钒钼黄比色法

方法原理  

植物样品经H2SO4—H2O2消煮分解制备待测液。待测液中正磷酸能与偏磷酸盐和钼酸盐在酸性条件下作用，形成黄色的杂聚化合物钒钼酸盐，其组成还不能十分肯定，有人认为是P2O5·V2O5·22MoO3·nH2O。溶液的黄色很稳定，其深浅与磷含量成正比，可用比色法测定磷的含量。比色时可根据溶液中磷的浓度选择比色波长400～490mm，磷的浓度高时选择较长的波长，较低时选用较短的波长。钒钼黄法要求比色液中酸的浓度（即终浓度）很宽，极限是0.04～1.6mol·L  （H+）酸度太高时显色不完全或不显色，太低时则可能生成沉淀或其它物质的颜色。钒酸盐的终浓度范围是8.0×10-5～2.2×10-3mol·L-’，通常用后一种浓度。钼酸盐的终浓度范围是1.6×10-3~5.7×10~3mol·L~1。在正常的室温变化范围内对黄色强度无影响。黄色发生很快，在最初15min内会降低约1.3%，以后至少2h 内很稳定，在24h内也无显著变化。

本法操作简便快速，准确度和重复性较好，相对误差为1%～3%灵敏度较钼蓝法低，适测范围为1～20mg·L-1；对酸的浓度要求不严格，容易控制，在HNO3、HCI、H2SO4、HCIO4等介质中都可适用；干扰离子少，特别是Fe3+的允许量远高于钼蓝法。因此，该法广泛用于植物和有机肥料样品中磷的测定。

 主要仪器：  消煮管（瓶）、控温消煮炉、分光光度计。

 试剂

（1） 钒钼酸铵试剂。称（NH4）6MoO24HO 12.5g溶于200mL水中。另将偏钒酸铵（NH4VO3）0.625g溶于沸水150mL中，冷却后，加入浓HNO3 125mL，再冷却至室温。将钼酸铵溶液缓慢地注入钒酸铵溶液中，随时搅拌，用水稀释至500mL。

（2）6mol·L-1NaOH溶液。称NaOH24g溶于水，稀释至100mL。

（3）2，6-二硝基酚指示剂。2，6-二硝基酚0.25g溶于100mL水中。其变色范围是pH2.4（无色）～4.0（黄色）。变色点是pH3.1。

（4）50μg′mL-1P标准溶液。准确称取经105℃烘干的KH2PO4  0.2195g，溶于水，移入1000mL容量瓶，加水至约400mL，加浓硫酸5mL，用水定容。装人塑料瓶中低温保存备用。

（5）固体Na2S2O3

（6）还原锌粉。

（7）水杨酸一硫酸。

 操作步骤  

吸取消煮好经过滤的待测液20～25mL（含P0.25～1.0mg），置于50mL容量瓶中，加2，6-二硝基酚指示剂2 滴，用6mol·L-1NaOH溶液中和至刚呈黄色，加入钒钼酸铵试剂10.00mL，用水定容。放置15min后用波长450mm，在分光光度计上比色，以空白液调节仪器零点。

标准曲线制作。分别吸取50μg·mL~*P标准溶液0、1.0、2.5、7.5、10.0、15.0于50mL容量瓶中，同上述操作步骤显色和测定，该标准系列P 的浓度分别为0、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、15.0pg*mL~1。

 结果计算