荧光定量（qPCR）原理、实验流程及结果分析
- 目的：由少变多
- DNA合成就会产生小沟，这个染料就喜欢在小沟里面闪闪发光。
- 染料其发光的数量和发光的程度呈正比
- 缺点：这个染料只识别小沟，所以非特异性扩增时，染料也会结合到小沟；所以总的荧光量不一定时目的基因的精确表达量。需要保证我们的产物是特异性的。
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- 5R-发光基团，3Q-催免基团；两者相互抵制
- PCR过程中DNA聚合酶就发挥外切酶活性，水解探针，破坏双方敌对的情况，漏出闪闪的光。
- 探针的退火温度比引物的退火温度高5-8℃；引物和探针是通过退火降温才结合在模版上的；那么探针需要比引物先结合到模版上，才能实现后面的水解过程
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> RNA不稳定原因
- 单链结构
- OH结构
- RNA酶
> Trizol --- 沉淀法
- RNase H 会降解DNA和RNA杂合链中的RNA
- 原核生物没有polyA尾
- 3'端偏好性
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- 基线期：荧光背景阶段
- 指数增长期：方程才适用
- 线性增长期：
- 平台期：
- 右图：每个峰代表一个特异性产物
- 右图是正常现象
- 阈值放在指数增长期的中间比较合理，不能过低或过高
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- 基线设置有问题；或模版浓度过高
- 15 调整为10
