原核表达蛋白

补充 1.前人的菌液一定要先验证，确保正确且活性较好（甚至可以最开始就用质粒重新转BL21（DE3）等表达蛋白菌株以确保活性良好） 2.诱导时选择IPTG到1，37度3h（数小时），先看能不能诱导出来（小表），降温和降低IPTG浓度是为了降低包涵体的量，保证可溶性蛋白足够后续实验 3.beads：如果beads吸出来一坨，堵住了枪头那可能是试剂没有保存好，染菌了 4.理论上gst纯化过程中，E废液中蛋白量很少（因为本身gst是助溶的，且2ml beads纯化500ml菌足够了，应该也不是beads的量的原因，如果beads本身没问题，那就算换个beads也没用，结合方式一样的嘛，所以有可能beads有点问题了） 5.蛋白的保存：分管保存-80度，用的时候拿一管出来放4度，就不要再放-80度了，避免反复冻融，统一就不放-20度了 6.蛋白直接放-80保存的更久还是制样保存-80更久？制样更久（当然看你纯化出来的蛋白是干啥的），制样保存-80度比-20度更久