Calcein AM（染色原理、使用方法、光谱）

Calcein AM染色原理

Calcein AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，由于它在Calcein的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂 (如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate) 相比，Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低。Calcein不会抑制任何的细胞功能如增殖或淋巴球的趋化性。使用了Calcein的活性检测的实验结果是十分可信并且与标准的51Cr-释放法所得结果相一致的。Calcein的激发和发射波长分别为490nm和515nm。     

Calcein AM结构式

Calcein-AM可与PI结合使用，分别对活细胞和死细胞染色，可用于同时对活细胞和死细胞进行荧光染色。     

Calcein AM使用方法

1. 用 DMSO 制备1mM 的 Calcein, AM溶液后，再采用 PBS 将其稀释制成为 1～50 μM 的Calcein, AM溶液。
2. 其次再将 1/10的细胞培养基体积的 Calcein, AM溶液 加入到细胞培养基中。
3. 在37℃恒温条件下，培养细胞约 15～30分钟。
4. 采用 PBS 或 适当的缓冲液洗涤细胞两次。
5. 使用490nm激发波长，515 nm发射波长滤光片的荧光显微镜进行观察细胞。
      ※ 如果 Calcein, AM 很难进入细胞，可以使用表面活性剂，例如：Pluronic F127。
      ※ 也可以用 1/10浓度的Calcein, AM溶液 代替培养基。

在不同基质上培养 3 天后，钙黄绿素-AM（绿色）和碘化丙啶（红色和黄色）染色的肝细胞的共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）图像。

Calcein AM光谱