牛、羊、猪源性成分的定性检测方法-荧光定量PCR法

一、实验简介

荧光定量PCR（qPCR）是一种利用荧光探针实时监测PCR反应进程的技术。在qPCR实验中，PCR反应结束后，荧光探针会与PCR扩增产物结合，荧光信号随着扩增产物的累积而增加。荧光信号的强度与扩增产物数量成正比，通过检测荧光信号的强度，可以快速、准确地定量和鉴定PCR反应产物。

在广州如期生物技术有限公司检测牛、羊、猪源性成分的实验中，采用qPCR技术，根据设计的特异性引物和探针，扩增目标DNA序列，并利用荧光探针实时检测PCR反应的进行过程。如果明胶中存在牛、羊、猪源性成分，引物和探针会特异性地扩增目标DNA序列，产生荧光信号。如果不含有这些动物源性成分，则PCR反应不会扩增目标DNA序列，荧光信号的强度极低或不发生。通过检测荧光信号的强度和产生的周期数，可以判断是否含有牛、羊、猪源性成分。

二、实验流程

1．提取样品DNA，并对其进行纯化和定量。

2．进行实时荧光PCR扩增，引物和探针会与目标DNA序列结合并扩增。反应中还需要添加荧光探针，用于检测PCR反应产物的数量。荧光探针在PCR反应中结合到DNA序列上时会发光，因此可以通过测量荧光信号来定量PCR产物的数量。

3．进行荧光定量PCR反应，并测量荧光信号。

4．根据测量到的荧光信号，可以确定是否存在特定的牛、羊、猪DNA序列。如果存在，则说明明胶中含有对应的动物源性成分。

需要注意的是，荧光定量PCR法只能用于定性检测，不能确定动物源性成分的含量。如果需要进行含量测定，可能需要使用其他技术。此外，该方法需要引物和探针的特异性很高，否则可能会导致假阳性或假阴性结果。因此，在实验设计中需要仔细考虑引物和探针的选择。

三、技术特点

1、高灵敏度：荧光定量PCR法可以在高度稀释的样品中检测到特定的牛、羊、猪DNA，因此可以检测到非常低浓度的牛、羊、猪源性成分。

2、高特异性：荧光定量PCR法基于特定的引物和探针设计，可以选择性地扩增牛、羊、猪特异性的DNA序列，因此不会被其他种类的DNA序列干扰。

3、快速、简便：荧光定量PCR法可以在短时间内完成扩增反应，不需要繁琐的操作流程，且可自动化进行。

4、可靠性：荧光定量PCR法具有高度可重复性和稳定性，可以准确、快速、可靠地检测样品中牛、羊、猪源性成分的存在和浓度。

5、大批量检测：荧光定量PCR法可以通过PCR扩增和实时荧光定量技术快速地检测多个样品，适用于大批量检测。

PCR电泳

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