培养细胞时，胰酶和双抗该怎么用？

胰酶和双抗作为细胞培养过程中试剂的一部分，对细胞培养成功与否存在着关键的作用。但是，对于胰酶和双抗的基础知识还是要多多了解的，不然就有可能祸祸你的细胞哦！

胰蛋白酶

胰蛋白酶是什么？

胰酶是一种解离试剂，本质是可以降解蛋白的酶，生物学实验中常用来把贴壁细胞从贴壁面解离下来和使细胞解聚，也可以用于原代细胞的传代过程中分散组织。

胰酶浓度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作为消化液。

为什么收到的胰酶会有颜色差异？

商品化胰酶溶液需要用干冰运输，在运输过程中，胰酶溶液中的二氧化碳与干冰挥发的二氧化碳可能会极少部分的气体交换，导致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚红作为PH值指示剂，因此胰酶PH的变化是肉眼可观察到的。由干冰运输过程中导致的PH值的变化很小，PH值会从7.2-8.0变化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的时候，溶液呈淡红色；PH值6.8左右时呈淡黄色。因此胰酶颜色的变化是由PH值的变化引起，归因于使用干冰运输。这种颜色的变化是行业普遍现象，在不同供应商的胰酶产品都会出现。

淡黄色的胰酶溶液能放心使用吗？

能，对于胰酶呈黄色的问题，不同品牌也都对此现象进行了测试实验。变色的胰酶同样能很好的用于细胞的解离，请放心使用。

细胞消化时，胰酶不去除对细胞的影响？

细胞消化时，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是没有问题的。

如果消化液中含有胰酶和EDTA，最好去除。EDTA是一种化学螯合剂，主要作用在于能螯合Ca、Mg离子，使细胞分离。但EDTA不能被血清中和，消化后要彻底清洗去除，否则细胞易脱壁。胰酶胰酶和EDTA联合使用可提高消化效率，所以常二者合用。

胰酶的保存

胰酶可在-20℃下保存一年。随着时间延长，胰酶的消化能力减弱。胰酶可分装冻存，在使用前从-20℃冰箱取出。尽量避免在4℃长期保存。

胰酶使用的时候要注意什么？

（1）在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。

（2）胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。

什么是双抗？

双抗就是青链霉素混合液，青链霉素混合液(100X) 。是专门用于细胞培养的，可以直接添加到细胞培养液内。

细胞培养中双抗为什么加青霉素和链霉素？

青霉素和链霉素属广谱抗生素，抗菌谱宽。

青霉素阻碍细胞壁合成，导致细胞泄漏；链霉素作用于核糖体，阻碍蛋白翻译。二者作用位点不同。

自然环境下（不考虑人为产生的抗药性），对青霉素不敏感的微生物绝大多数对链霉素敏感，反之亦然。两种抗生素搭配可以控制几乎全部常见细菌。

双抗作用是什么？

双抗的作用：抗生素，抑制细菌生长；避免细胞污染。

培养液中需要加入双抗吗？

加不加双抗不是绝对的，视实际情况而定。

如果你实验室条件足够好，如果你操作足够规范，就尽量不要加双抗。

相反，如果你实验条件不够，操作也没有绝对把握，还是建议加双抗进行培养。

如果您不确定是否有必要，最好的方法是做一段时间的对照实验，看有没有必要加双抗。

如何加入双抗？

在细胞培养液中推荐的青霉素的工作浓度为100U/ml,链霉素的工作浓度为0.1mg/ml。

如浓度较高对细胞毒性太大，细胞生长艰难。

加入双抗时，一般按照比例加入培养基中，不建议直接在换液传代滴加双抗，因为浓度实在不好控制。

双抗的保存

双抗通常情况下在-20℃保存一年。由于该试剂在4℃下长期存放是不稳定的，应分装后在-20℃下避光保存。青霉素在2-8℃存放时间不应超过4天，链霉素相对稳定一点，在2-8℃可以存放30天左右。切记，双抗从冻融后基本成分已开始降解。 

误区：长期使用抗生素，以对抗细胞污染

•细胞培养时不应常规使用抗生素

•连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细菌株的产生，导致轻度污染持续存在，一旦将抗生素从培养基中去除，这种轻度污染最终将发展成大规模污染

•连续使用抗生素会掩盖支原体感染及其他隐性污染

•有些抗生素会与细胞发生交叉反应，干扰您研究的细胞过程

以上内容由海星生物提供 

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