限制性内切酶消化/限制性内切酶

限制性消化也称为限制性核酸内切酶，是在特定位点切割 DNA 的过程，由周围的 DNA 序列决定。限制性消化是通过将靶 DNA 分子与限制性内切酶（识别和结合特定 DNA 序列并在识别序列内或识别序列外切割特定核苷酸的酶）温育来完成的。限制性消化可导致产生平末端（以碱基对结尾的 DNA 分子末端）或粘性末端（以核苷酸突出端结尾的 DNA 分子末端）。限制性消化通常用于制备用于子序列分子克隆的 DNA 片段，因为该过程允许 DNA 片段像构建块一样通过连接拼凑在一起。限制性消化的结果可以通过凝胶电泳进行评估，其中消化产物在施加电场的聚合物凝胶中按分子长度（基于 DNA 分子的负电荷）分开。典型的限制性消化反应的成分包括 DNA 模板、选择的限制性内切酶、缓冲液，有时还包括 BSA 蛋白。反应在限制酶最佳活性所需的特定温度下孵育并通过加热终止。