微生物的纯种分离和接种技术

       平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当做微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。

1.微生物的分离纯化→保种操作步骤

清洁桌面→划线操作→恒温培养→挑单菌落→试管斜面保种→清洗培养皿

2.平板划线分区

        将微生物在固体培养基表面多次作由点到线稀释而达到分离目的。划线的形式有多种，其中一种先按无菌操作方法用接种环先划A区，约划1~2条线，划好后，并将接种环在火焰上烧，除去接种环上的剩余菌，然后过A区的线画B区，同样C,D区，后一区线只与前一区相交，D区后不烧直接F区，F区不接触前面的区，最后将接种环灭菌，置原处。这样所划线上出现大量的单菌落，与开始菌落相同的属于纯种，作为菌种进行保藏。

3.划线操作

（1）找出实验用的菌种

（2）灼烧接种环

（3）先划A区

①将平板倒置在酒精灯火焰旁→检查是否有杂菌

②菌液培养皿过火焰 冷却 取种

③在A区轻巧地划1~2条线→对菌液做出初步稀释→烧去接种环上的残余菌种

（4）划其余区

将烧去残菌的接种环放在平板边缘冷却→使B区转至划线→把接种划通过A区而转移至B区→在B区轻巧地划上2~3条致密的平行线。在C、D、F区同样操作→使D、F区线条与A区平行（但F区不能与A区或B区的线条接触） →烧去接种环上的残菌

4.恒温培养

标记 ，将划好线的平板装入保鲜袋→向袋子里喷酒精→将平板放入温箱中→设置温度为37 ℃ →培养1~2天。

5.单挑菌落

良好的结果出现的D区域→独立分布的单菌落在F区域→从F区挑选少量菌体至试管斜面→培养得到初步分离的纯种。

6.清洗培养皿

将废弃的带菌平板在微波炉杀菌