ActinRed 555 ；细胞骨架红色荧光探针

ActinRed 555 Probes(细胞骨架红色荧光探针)一种高亲和的 F-肌动蛋白探针由Flour 荧光染料与鬼笔环肽偶联而成。这些荧光标记的鬼笔环肽对于不同物种（包括动植物）的细胞骨架肌动蛋白具有相同的结合特性。此外，这些鬼笔环肽偶联物对 F-肌动蛋白具有高亲和性和高选择性，广泛用于多色成像研究领域。最大激发/发射波长（Ex/Em）: 540～546/565～575nm。

ActinRed 555 ReadyProbes 染色方法：
注意：对于某些特定的实验体系，我们提供的染色方案可能需要优化。但在大多数情况下，按照本操作说明可取得一致的结果。
以下方法以细胞爬片的染色步骤为例：
1. 用 PBS（pH7.4）轻轻洗涤细胞爬片。
2. 用 3.7%的多聚甲醛（PBS 配制）室温固定细胞，时间为 10 分钟。
注意：甲醇在固定过程中可能会破坏细胞肌动蛋白，因此**避免任何含甲醇的固定剂。首选的固定剂是不含甲醇的多聚甲醛溶液。
3. 用 PBS 清洗细胞样品两遍或以上。
4. 将细胞爬片置于干净的玻璃培养皿中，用含 0.1% Triton X-100 的 PBS 缓冲液室温透化样本，处理时间 3-5 分钟。（也可使用丙酮溶液透化处理，但需至于-20℃）
5. 用 PBS 清洗细胞样品两遍或以上。
6. 用含 1% BSA 的 PBS 封闭细胞，时间为 20-30 分钟。
7. 向细胞爬片上滴加两滴 ActinRed 555 Probes，室温避光孵育 30 分钟。为避免染料蒸发，请将爬片置于密闭的湿盒中。
8. 用 PBS 清洗细胞样品两遍或以上。
9. 如需长期保存，请将细胞样品至于空气中自然晾干，并用封片剂封片。储存于 2-6℃避光环境下的样品正常可至少保存半年。

图 1:使用 Image-iT 固定/透化试剂盒固定和透化 BPAE 细胞。 肌动蛋白使用 ActinRed 555 ReadyProbes 试剂染色，细胞核使用 NucBlue Fixed 染色。