基因工程—表达载体构建【选必三】|0基础救星！

3.2.3 表达载体构建

一、表达载体构建

1.基因工程的基本操作程序

①目的基因的筛选与获取

②基因表达载体的构建

③将目的基因导入受体细胞

④目的基因的检测与鉴定

2.基因表达载体构建

（1）目的

构建基因表达载体是为了使目的基因在受体细胞中稳定存在，复制，表达。

（2）过程

（3）基因表达载体的组成

基因表达载体包含目的基因、启动子、终止子、标记基因，(复制原点)。

启动子：RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录

终止子：RNA聚合酶脱离部位，终止转录

标记基因：用于鉴别受体细胞中是否含有目的基因，例如抗生素抗性基因，荧光蛋白合成基因等

1）单酶切和双酶切

①单酶切的弊端

单酶切的结果：①目的基因和质粒的正向连接②目的基因和质粒的反向连接③目的基因或质粒自连。

只有目的基因和质粒的正向连接是基因工程中所需要的重组DNA。

②双酶切的优势

双酶切能保证自的基因与运载体定向连接，防止目的基因与运载体发生任意连接或自连。

二、导入受体细胞

1.目的基因导入受体细胞

三、目的基因检测与鉴定

探针：在含目的基因的DNA片段上用放射性同位素（或荧光分子）标记

【DNA分子杂交技术】将转基因生物的基因组提取出来，在含目的基因的DNA片段上用放射性同位素（或荧光分子）标记，以此作为探针，使探针与基因组DNA杂交，若显示出杂交带，就表明目的基因已导入受体细胞。

【核酸分子杂交技术】从转基因生物中提取出mRNA，同样用标记的目的基因作探针与mRNA杂交，若显示出杂交带，则表明目的基因转录出了mRNA。

【抗原-抗体杂交技术】从转基因生物中提取出蛋白质，用相应的抗体进行抗原-抗体杂交。若有杂交带出现，表明目的基因已表达合成出蛋白质。

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