快速内切酶XhoI使用方法说明

快速内切酶XhoI背景：

FlyCut™ 酶是一系列能够快速消化DNA的工程限制性酶。所有FlyCut™酶在通用CutOne中显示出优异的活性™ 和CutOne™ 彩色缓冲液，能够在5~15分钟内消化DNA。这使得任何限制性酶的组合都能在一个反应管中同时工作，并消除了连续消化的需要。FlyCut™ 酶已通过多项严格的质量控制，可用于消化质粒、基因组和病毒DNA以及PCR产物。CutOne™ Color Buffer包括密度试剂以及红色和黄色跟踪染料，可以将反应混合物直接装载在凝胶上。CutOne的红色染料™ 彩色缓冲液在1%琼脂糖凝胶中与2.5kb双链DNA片段一起迁移，黄色染料在1%琼脂凝胶中与10bp双链DNA碎片一起迁移。

 

艾美捷快速内切酶XhoI：

Cat #: C-BSM583

Size: 500 rxns

Storage: -20°C

 

快速内切酶XhoI组成：

 

推荐反应条件：

1x CutOne“缓冲液；在37°C下培养；有关反应设置，请参阅“快速DNA消化方案”。

热灭活

在80°C下培养20分钟。

质量控制：

功能测试

A20μl在含有1μgλDNA（Hindli消化物）和1μl FlyCut’’Xhol的CutOne“缓冲液中的反应在37℃下孵育15分钟，通过琼脂糖凝胶电泳确定完全消化。

长时间培养/星形活性测定

在含有1μgλDNA（HindlI消化物）和1μl FlyCut“”Xhol的CutOne“”缓冲液中，在37℃下孵育3小时，20μl反应产生琼脂糖凝胶电泳测定的无可检测核酸酶降解的DNA模式。较长的孵化时间可能导致恒星活动。

结扎和清算

在37℃下用FlyCut“”Xhol消化10倍后，>95%的DNA片段可以在22℃下与T4 DNA配体连接。在这些连接的片段中，通过琼脂糖凝胶电泳测定，>95%可以用FlyCut“Xhol重新切割。

非特异性核酸内切酶活性

在含有1μg超螺旋质粒和1μl FlyCut“”Xhol的CutOne“”缓冲液中进行20μl反应，在37℃下培养4小时，通过琼脂糖凝胶电泳测定，转化为刻痕或线性形式的转化率<10%。

 

蓝/白筛选试验：

用1μl FlyCut消化含有lacZα基因的合适载体™ XhoI。将消化产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有X-Gal、IPTG和适当抗生素的Luria Bertani培养板上，成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断基因（即降解的DNA末端）产生白色菌落。FlyCut™ 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。

 

使用方法：

1.快速DNA消化方案

① 按照指示的顺序在冰上混合反应组分

② 轻轻搅拌并向下旋转；

③在37°C下培养15分钟（质粒DNA）或15～30分钟（PCR产物）或30～60分钟（基因组DNA）；

④ 可选：在80°C下加热20分钟使酶失活；

⑤如果CutOne™ 在反应中使用颜色缓冲液，将反应混合物的等分试样直接装入凝胶中。

 

2.DNA的双重和多重消化

①每种酶使用1μl，并适当扩大反应条件；

②反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10；

③如果酶需要不同的反应温度，从需要较低温度的酶开始，然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。

 

3.扩大质粒DNA消化反应