qPCR简介

qPCR全称Real-time Quantitative PCR，即实时荧光定量聚合酶链式反应。qPCR利用荧光染料或荧光探针标记双链DNA分子，因此能在DNA扩增过程中，通过荧光量积累实时监测整个PCR进程中核酸扩增产物含量的变化，之后利用数学函数关系对荧光量积累结果分析，获得待测样品中靶基因的含量。

qPCR的原理

PCR是一种链式反应，即每次扩增后的产物可作为下次扩增的底物，而在qPCR中，每次扩增后产物的含量均可以通过对应的荧光量表示，因此可通过设定一个荧光量阈值，统计达到该阈值所对应的PCR扩增数（循环数，Ct值），来计算待测样品中靶基因的含量。待测样品中靶基因的含量（拷贝数）越高，达到阈值所对应Ct值越小，反之，待测样品中靶基因的拷贝数越低，达到阈值所对应Ct值越大。因此利用已知起始拷贝数的标准品制作标准曲线，横坐标代表Ct值，纵坐标代表起始拷贝数的对数，利用获得待测样品的Ct值，即可从标准曲线上得出样品中靶基因的拷贝数。

在实际的应用中，为了确保结果的准确性，通常会在qPCR中添加内参基因，通过对比内参基因与靶标基因的Ct值，可以将靶基因的表达水平归一化，便于后续比较不同处理下基因表达量的变化，或表征不同基因在特定实验条件下的表达水平。