自噬研究工具 | LC3自噬慢病毒实验原理及应用
什么是细胞自噬？
简单的说就是“吃掉自己”。是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。
该过程中一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后，送入溶酶体(动物)或液泡(酵母和植物)中进行降解并得以循环利用。自噬包括生理条件下的基础型自噬和应激条件下的诱导型自噬。研究表明，自噬能在细胞稳态、衰老、免疫、肿瘤发生及神经退行性疾病等多种生理病理过程中发挥重要作用。
LC3（自噬标志物）
是微管相关蛋白轻链3(MAP1LC3)的简称，它贯穿整个自噬过程，哺乳动物的LC3可分为三种：LC3A、LC3B和LC3C。
自噬发生时，LC3 蛋白合成后立即在其羧基端被 Atg4 所剪切，产生细胞浆定位的 LC3-I。在自噬过程中，LC3-I 会被包括 Atg7 和 Atg3 在内的泛素样体系所修饰和加工，产生分子量为 14kD 的 LC3-II，并定位到自噬小体中。
LC3-II 的含量和发生自噬的程度成正比，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。
得益于荧光蛋白技术的发展，我们可以通过荧光蛋白标记的方式，直观的看到自噬现象和过程。
自噬病毒工具，便于直接感染目的细胞后直观地观察细胞自噬的整体水平。
自噬单荧光标记慢病毒
吉满自主研发出单荧光(绿光或红光)标记的自噬指示产品，当细胞内没有自噬发生时，荧光-LC3融合蛋白会均匀地分散在细胞质中，一旦细胞发生自噬活动，荧光-LC3融合蛋白就会聚集并转位到自噬体膜，此时在荧光显微镜下可清晰地观察到明亮的荧光斑点，斑点数量的多少就代表了自噬活动的强弱。
自噬双荧光标记慢病毒
吉满自主研发的双荧光自噬慢病毒，可用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白，而mRFP是稳定的荧光表达基团，不受外界影响。由于自噬小体进入第二阶段后，与溶酶体进行融合，形成自噬溶酶体。由于自噬溶酶体内的酸性环境，导致PH下降，GFP淬灭，因此，GFP的减弱表明溶酶体与自噬小体融合形成了自噬溶酶体。而mRFP是一直稳定表达的，因而可以通过GFP与mRFP的亮点比例来评价自噬流进程。
产品清单
引文展示
案例一：Irisin ameliorates doxorubicin-induced cardiac perivascular fibrosis through inhibiting endothelial-to-mesenchymal transition by regulating ROS accumulation and autophagy disorder in endothelial cells
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使用pGMLV-GFP-LC3 慢病毒(Genomeditech Co., Ltd.)感染CMEC细胞，使用荧光显微镜观察经过DOX和Irisin处理的CMEC细胞发现(图O-R)，Irisin可以促进CMEC细胞自噬的形成，并且可以部分挽救CMEC细胞中因DOX造成的自噬紊乱。
案例二：N6-methyladenosine modification regulates ferroptosis through autophagy signaling pathway in hepatic stellate cells
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使用CMV-TurboRFP-EGFP-LC3-PGK-Puro和 pGM-CMV-GFP-hLC3(Genomeditech Co., Ltd.)病毒感染HSC-LX2细胞，erastin (10μM)处理24小时后，通过观察RFP-GFP-LC3斑点形成发现(如图所示)，过表达FTO和敲低METTL4可以显著抑制HSC-LX2细胞铁死亡过程中的自噬流。
案例三：Obatoclax and LY3009120 Efficiently Overcome Vemurafenib Resistance in Differentiated Thyroid Cancer
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本研究使用GFP-RFP-LC3(Genomeditech Co., Ltd.)病毒感染K1细胞，通过共聚焦显微镜观察发现(图A)，1 μM Obatoclax处理K1细胞24h后，GFP-RFP-LC3阳性自噬斑点显著增加；TEM观察表明(图B)，Obatoclax处理后，K1细胞出现与溶酶体共定位的自噬囊泡形成，并且损伤的溶酶体或大泡明显增加，间接表明Obatoclax中和了溶酶体。
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2020年成立了专业细胞系子品牌DDXCELL，提供报告基因检测、病毒包装、工程细胞株构建，基因编辑及药物筛选评价等技术服务及相关产品。
2022年载体品牌“载体通·Genovector”焕新升级，同时推出全新试剂品牌“优试剂·Genoagent”，贯穿科研始末。
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