一、甲基化简介

DNA甲基化是最早发现的修饰途径之一，真核生物中甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA甲基化转移酶（DNMTs）的作用下，CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。

大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因重新活化和表达，这种DNA修饰方式在不改变基因序列的前提下实现对基因表达的调控。

二、BSP实验原理

亚硫酸氢盐处理后测序法（bisulfite sequencing PCR,BSP）是检测基因甲基化的经典方法，其原理为：用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶（C）被转化为尿嘧啶（U）而甲基化的胞嘧啶则不变。

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后在CpG岛两端设计引物进行PCR扩增，将目的产物纯化后进行TA克隆，每个克隆挑取阳性克隆测序，最后将测得的序列与原始序列比对，统计甲基化位点及数量，并分析甲基化程度。

三、BSP结果与分析

点状图

展示甲基化的经典方法，白色空心点表示未发生甲基化的CG位点，黑色实心点表示发生甲基化的CG位点。

柱状图

目的基因待测片段的综合甲基化水平，即黑色实心点数/（黑色实心点数+白色空心点数），以甲基化比例为数据源，制作柱状图。

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