酸菜 | 《三十六策重置版》（解螺旋）第九策因材施教

1.有表达：在疾病中有表达差异。

qPCR：检测mRNA表达水平

WB：检测蛋白水平变化。

需用到测序：设计引物、克隆基因（用于过表达）、设计siRNA、shRNA。

检索基因：三个数据库

从GENE数据库找到基因可以链接到nucleotide里的mRNA

腺病毒：主要用于做过表达，做RNA干扰时免疫源性较强，不推荐。

慢病毒：本质是逆转录病毒；尤其适合做RNAi，也可用于CRISPR；表达短的插入片段；理论上整合到基因组可长期稳定表达；过表达上有局限性，是一个沉默载体。

腺相关病毒：过表达载体。

做RNAi干扰时：shRNA 是siRNA的前体。前者更稳定

阴性对照：

过表达实验里，阴性对照是空载体；

RNAi里，是一段打乱的序列，一段无效的siRNA

拯救实验：能很好的消除假阳性；在一个细胞里进行正反两次验证。

单变量拯救实验：先把基因用siRNA沉默掉，然后把稳定沉默基因的细胞再分成两组，一组转空载体对照，另一组转入过表达载体，及过表达和沉默（细胞表型功能）。再在一个细胞里先沉默后过表达（反之亦然），将其表型与沉默和过表达的表型做对比。

配图：

fig.1：组织和细胞表达的数据。

fig.2：细胞水平（in vitro）功能研究。a.提供过表达或者沉默有效的数据；其余的应该是用来检测表型功能的实验：如增值和细胞周期的表型（增值：细胞生长曲线；细胞周期：流式），一个表型用多个不同原理实验进行佐证。

fig.3:体内动物实验in vivo水平表型验证。