技术分享 | 吉满生物提供一系列基因过表达研究工具（下）

背景介绍

基因过表达(gene overexpression)是将目的基因编码区序列(CDS)克隆到相应的质粒或病毒载体上，利用载体骨架上构建的调控元件，使基因可以在人为的控制条件下实现大量转录和翻译，从而实现目的基因的过表达。此外，还可以选择报告基因进行示踪或抗性基因进行筛选。

常用的基因表达载体有质粒载体和病毒载体，病毒载体又包括：腺相关病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体和逆转录病毒载体等，广泛应用于体外和体内基因功能研究。

上篇为大家介绍了质粒载体、慢病毒载体、腺相关病毒载体三类基因过表达工具，详情可点击基因过表达工具介绍(上)查看，今天继续为大家介绍其他三种工具，一起往下看吧~

【吉满生物】基因过表达工具介绍（下）

04 PiggyBac转座载体

PiggyBac属于II类转座子，通过“剪切-粘贴”机制移动，即从基因组一个位置转座到另一个位置，不留下序列本身(与I类启动子通过“复制-粘贴”的移动方式不同)，是目前转基因研究中应用最广泛的工具之一。

PiggyBac转座子可利用质粒转染(非病毒转导)把感兴趣的基因长期稳定地整合到靶细胞基因组。具有安全、高效、负载容量大的优点，且相对于一般载体，其插入位点为TTAA，因此具有比较高的特异性。piggyBac转座系统不仅可作为哺乳动物及培养细胞的转基因工具，也是一种潜在的非病毒类基因治疗载体。

PiggyBac系统包含两个载体：一个载体被称为辅助质粒，负责编码转座酶；另一个载体被称为转座子质粒，包含两个末端重复序列(TRs)以及两者之间的被转座区域。

载体特点

①安全性高、操作方便(可直接用质粒转染细胞）

②体载容量大(10kb-20kb)，可实现多基因的共表达

③转基因可长期稳定地表达，通过调节转座子质粒和辅助质粒的比例，提高外源基因的整合效率

④易于确定整合位点，通过反向PCR精确确定目的基因插入的位置

⑤不同类型细胞转染效率差异较大

吉满服务

吉满生物的PiggyBac转座子载体与辅助质粒经过优化后，可在大肠杆菌中高拷贝复制。该载体系统对多种类型的靶细胞均具有高效的转导效率，实现外源基因的高水平表达。

05 Tet-On诱导表达慢病毒载体

Tet-On诱导表达系统是调控目的基因定时表达的强大工具，Tet-On诱导表达载体在没有四环素或其他类似物(doxycycline)存在时，目的基因几乎不表达；当添加四环素/Dox时，目的基因得以快速高水平表达。Tet-on表达调控系统是当前应用更为广泛的四环素调控系统！

载体特点

①精准调控：Tet-On表达载体可严格调控基因的表达，药物剂量及用药时间可控，在没有诱导剂的情况下可将背景泄露最小化，并保持该系统对四环素诱导的高灵敏度；

②表达量高：TRE启动子可驱动GOI在诱导状态下高水平表达；

③安全性好：四环素及其衍生物应用多年，安全可靠；低剂量即可获得良好的效果。

吉满服务

吉满生物能为客户提供Tet-on表达调控载体，并能根据客户需要包装成Tet-On慢病毒。

06 CRISPRa（转录激活）

CRISPR-Cas9系统是目前被广泛运用的基因编辑系统，其原理是由sgRNA介导Cas9核酸酶靶向目标序列，对序列进行切割。Cas9核酸酶剪切活性取决于两个结构域：RuvC和HNH。当这两个结构域同时处于失活状态时，Cas9将不具有核酸酶活性，成为dCas9(dead Cas9)。

CRISPRa(基因激活)系统是用于激活内源性基因转录的强大工具，切割失活的dCas9连上转录激活因子(如VP64、p65和HSF1)，可以有效促进基因组特定位点的转录。研究表明，三种基于CRISPR-dCas9的转录激活系统(VPR, SAM和SunTag)在动物细胞中也能提高目的基因表达，并且效果更好，应用更广泛。

载体特点

①操作简易：仅需dCas9核酸酶、sgRNA和转录激活因子(如VP64)，即可调控目的基因的转录水平；

②调控可逆：与常规转基因技术相比，不需导入外源DNA，不会永久性的修饰基因组DNA；

③强烈激活：转录激活的基因通常得到非常高水平的表达；

④适用广谱：无物种限制、无细胞种类限制。

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吉满生物科技（上海）有限公司成立于2011年，是专业从事生物科技前沿技术研发的高新技术企业。以病毒包装为基础，密切关注行业最前沿的科研进展，十二年深耕细作，创建了具有自主知识产权的分子生物学、细胞生物学、慢病毒、腺相关病毒、报告基因、抗体表达六大技术平台。

2020年成立了专业细胞系子品牌DDXCELL，提供报告基因检测、病毒包装、工程细胞株构建，基因编辑及药物筛选评价等技术服务及相关产品。

2022年载体品牌“载体通·Genovector”焕新升级，同时推出全新试剂品牌“优试剂·Genoagent”，贯穿科研始末。

吉满可为客户提供几千种的现货载体和一站式定制服务。