主要组分：

活性超级生物素     2mg/4mg/6mg

超 滤 管        1支

标记缓冲液       30mL/60mL/90mL

标记物保存液      2mL/4ml/10ml

助溶剂（DMSO）     1mL/1.5mL/2mL

选购之前客户需要根据待标记物的分子量大小和标记量选择最适宜的型号

    产品编号

最大标记体积

待标记物最小分子量

可标记抗体量

ARL0020S-3K-0.5mL

0.5mL

3kDa

0.2-10mg

ARL0020S-3K-4.0mL

4.0mL

3kDa

1.0-80mg

ARL0020S-3K-15mL

15mL

3kDa

5-300mg

ARL0020S-10K-0.5mL

0.5mL

10kDa

0.2-10mg

ARL0020S-10K-4.0mL

4.0mL

10kDa

1.0-80mg

ARL0020S-10K-15mL

15mL

10kDa

5-300mg

ARL0020S-30K-0.5mL

0.5mL

30kDa

0.2-10mg

ARL0020S-30K-4.0mL

4.0mL

30kDa

1.0-80mg

ARL0020S-30K-15mL

15mL

30kDa

5-300mg

ARL0020S-50K-0.5mL

0.5mL

50kDa

0.2-10mg

ARL0020S-50K-4.0mL

4.0mL

50kDa

1.0-80mg

ARL0020S-50K-15mL

15mL

50kDa

5-300mg

ARL0020S-100K-0.5mL

0.5mL

100kDa

0.2-10mg

ARL0020S-100K-4.0mL

4.0mL

100kDa

1.0-80mg

ARL0020S-100K-15mL

15mL

100kDa

5-300mg

产品介绍：

本生物素标记试剂盒提供了超级生物素快速标记所需全部试剂，用于含有伯氨基（NH2-）的蛋白/抗体/多肽或者其他大分子的标记。本生物素通过其反应原理如下:

产品特点：

l 延长了生物素的连接臂,更少地减少空间位阻,也可以适合于细胞的表面标记;

l   使用方法简单，无需额外准备试剂；

l   节约时间，整个过程仅需 90min；

l   通过离心脱盐和去除游离的生物素,无需透析或者凝胶过滤；

 

超级生物素标记使用量的计算：每个反应中生物素试剂的使用量取决于待标记蛋白质的量和浓度。例如,通过我们实验数据分析表明,标记2mg/ml 的抗体（IgG ，150KD），使用生物素和抗体的分子比为 20:1 能达到最佳效果;其他蛋白的标记可以根据实际情况,参照此比例类推。

计算公式如下：

其中：V(µL)为生物素的体积；

      V1(mL)为待标记物（蛋白/抗体/其他含有伯胺-NH2的大分子）；

      C1(mg/mL)为待标记物的浓度；

      R 为生物素与待标记物的分子比例；           

      M为待标记物的分子量（道尔顿，Dalton，Da）

      C(mM)为生物素的浓度

 

计算示例：我们将生物素配置成10mM的浓度，用来标记1mL 的2mg/ml 的抗体（IgG ，150KD）,准备加入的生物素与抗体的比例为20:1，那么带入公式计算

实验前准备：

1.仔细阅读使用说明书。

2.按照生物素标记使用量的计算的公式计算所需要的生物素的量。

3.提前 20min 从冰箱中取出试剂盒，使试剂盒各组分平衡至室温。

4.用助溶剂DMSO将活性超级生物素配制成10mM(2mg超级生物素加DMSO 440ul) 

 特别提示：

A.       溶解的活性生物素最好一次性使用完，如果使用不完可以密封放在-20℃的冰箱内，一月内可以使用，但是标记效率会降低；

B.       生物素助溶剂使用完之后需要立即密封保存，防止吸潮。

 

操作步骤：（本操作步骤按照 1mg抗体的量进行标记）

1.取1mg 待标记抗体于超滤管中，并加入不超过超滤管最大体积的标记缓冲液，12,000g 离心 10min；可以重复此步骤多次；最后一次超滤完成，可以加入适量标记缓冲液调整抗体的浓度到2mg/mL左右；

请注意：

A.超滤管的最大体积和最大截留分子量，本实例超滤管的最大体积为 0.5mL；

B.如果待标记抗体浓度低时，可先超滤离心浓缩；

C.如果待标记物含有游离的氨基（Tris,氨基酸或者其他干扰物，需要用标记缓冲液反复超滤确保其去除干净）

 

2. 加入13.3µL溶解的活性超级生物素至上述超滤管中，并轻轻吹打混匀。放入 37℃恒温箱中避光温育 30min。

3. 12,000 x g 离心 10min。

4. 加入适量标记缓冲液至上述超滤管中，并轻轻吹打混匀，12,000g 离心 10min， 重复此步骤多次。

5. 收集超滤管中的溶液（即生物素标记的抗体），加入等体积保存液，-20℃保存。

注意事项：

1.本试剂盒适用于所有含有伯氨基（NH2-）的大分子物质的标记，（蛋白，抗体，以及其他含有伯氨基（NH2-）的化合物分子），具体标记比例根据待标记物中氨基的数量确定；

2.本试剂盒中的生物素助溶剂为DMSO ，使用完毕后要密封干燥保存；

3.本试剂盒配备了标记物保存液，实验人员也可以根据被标记物的特点不同，选择更适合的保存液。

4.本试剂盒未开封前的有效期为18个月，请在有效期内使用。

5.本系列试剂盒提供的为超滤管分为不同的截留分子量和不同的最大容积，客户需要根据自己要标记的物质的分子量大小和标记量选择适合的型号。

 

*本试剂仅供实验室研究使用

案例文献：

Screening of the candidate inhibitory peptides of subtilisin by in vitro RNA display technique

H Wang, P Song, X Li, Y Wang, S Gui, Y Liu… - International Journal of …, 2020 - Elsevier

…

Biotin modification of the purified subtilisin Savinase (Activity: 4.4 × 105 U/mL, from Tianjin Nuoao Technology Co., Ltd., China), was performed by using the biotin labeling kit (Friendbio Science & Technology Co., Ltd., China). A 10 kDa ultrafiltration tube (Millipore, USA) containing 500 μL of subtilisin solution was centrifuged and concentrated. Consequently, 200 μL of labeling buffer and 13.3 μL of super biotin solution were added and mixed, followed by an incubation of the mixture at 37 °C in the dark for 30 min. The mixture was centrifuged and concentrated at 12000 r/min for 10 min. The filtrate was discarded, and 300 μL of labeling buffer was added to the retention solution. The mixture was vortexed, followed by centrifugation and concentration. The retention solution was collected for the magnetic bead fixation after repeating the procedure twice. 100 μL of streptavidin (1 mg) magnetic beads (Wuxi BioMeg Biotechnology Co., Ltd., China) were taken in a magnetic bead tube and washed with PBS pH 7.4 thrice [41,42]. Subsequently, 100 μL PBS and 100 μL of biotin-modified subtilisin solution were added, and the mixture was shaken at room temperature for 30 min to keep the magnetic beads in suspension for immobilization. The subtilisin-immobilized magnetic beads were washed with PBS thrice and resuspended in 80 μL PBS.