Y2H，酵母双杂交测定

酵母双杂交 (Y2H) 测定是一种成熟的检测蛋白质-蛋白质相互作用的技术。 对于研究人员来说，这是一个极其强大的工具，通常与一种或两种其他方法一起使用，以检查细胞中发生的多种相互作用。 该测定易于执行并在短时间内产生高质量的结果。

原则

1. Y2H 测定依赖于报告基因（如 lacZ 或 GFP）的表达，该基因通过特定转录因子的结合而被激活。

2. 转录因子由 DNA 结合域 (BD) 和激活域 (AD) 组成。

3. 与 BD 融合的目的蛋白称为 Bait，与 AD 融合的蛋白库称为 Prey。

4. 为了激活报告基因的表达，转录单位必须存在于基因位点，这只有在 Bait 和 Prey 相互作用时才有可能。

理论

报告基因的表达需要转录因子的结合，转录因子通常由两个功能和结构独立的结构域组成：DNA 结合 (DB) 和激活 (AD) 结构域。 DB 域与报告基因上游的特定 DNA 序列结合，而 AD 域激活报告基因表达（图 1A）。

图 1：Y2H 原则。

由于 AD 和 DB 结构域在功能和结构上是独立的，因此它们可以融合到两个独立的蛋白质中。 与 DB 结构域融合的蛋白质称为 Bait，而与 AD 结构域融合的蛋白质称为 Prey。

在没有 Bait-Prey 相互作用的情况下，AD 域无法定位到报告基因以驱动基因表达（图 1B）。 然而，当 Bait 和 Prey 相互作用时，DB 结构域与定位报告基因上游 AD 结构域的 DNA 结合，导致报告基因的表达（图 1C）。