CD63-EGFP标记外泌体/外泌体包裹重组外源蛋白/跨膜蛋白3包装外泌体的制备与研究

今天瑞禧生物小编要给大家整理分享的是CD63-EGFP标记外泌体/外泌体包裹重组外源蛋白/跨膜蛋白3包装外泌体的制备，一起来看！

肝窦内皮细胞（LSEC)是肝常驻抗原提呈细胞，可摄取门静脉血中的抗原物质，诱导肝乃至全身的特异性免疫耐受。具有刺激免疫应答和诱导免疫耐受的双重作用。由于外泌体尺寸很小，以往研究缺少用成像的方法直接观察外泌体与LSEC的相互作用。

通过免疫磁珠分选LSEC，密度梯度离心纯化CT26.WT细胞培养液来源的外泌体，荧光染料DiI标记后，采用CLSM直接观察LSEC 在体外对外泌体的摄取。应用基因工程方法构建CT26-DsRed/EGFP-Exo转基因细胞，建立CT26-DsRed/EGFP-Exo小鼠结肠原位荷瘤模型，应用CLSM“可视化”研究在体内环境下LSEC对外泌体的摄取。

结果

经anti-CD146免疫磁珠分选出的LSEC 在扫描电镜下具特征性“窗孔”结构，FCM检测显示CD146+ LSEC中超过80%的细胞为VWF阳性。LSEC贴壁后，呈特征性铺路石样外观。用超速离心法分离出的CT26.WT细胞培养液来源的外泌体，透射电镜下表现为具有双层膜结构的囊泡，直径在30~100nm之间，Western blot和免疫胶体金检测均证实其富含外泌体的标志蛋白CD63。荧光染料DiI能够标记外泌体，命名为Exo-DiI。在LSEC培养体系中加人Exo-Dil，CLSM下可见LSEC胞质内很快出现Exo-DiI，呈红色点状荧光，说明LSEC 在体外可快速摄取外泌体。经小鼠尾静脉注射Exo-DiIl后，制备肝脏冰冻切片，CLSM下可见anti-VWFFTTC标记的LSEC同Exo-DiI位于肝血窦内相同区域,说明LSEC可快速摄取肝血窦中的外泌体。利用anti-CD146免疫磁珠分离纯化LSEC，经anti-vWF-FITC染色后置CLSM下观察，可见LSEC中摄取有Exo-DiI，进一步证实LSEC能够快速摄取流经肝血窦的外泌体。

CT26-DsRed/EGFP-Exo转基因细胞在CLSM下，红色荧光蛋白DsRed将细胞整体标记为红色，CD63-EGFP将多泡体标记为绿色，在融合图像上呈黄色点状。建立CT26-DsRed/EGFP-Exo小鼠结肠原位荷瘤模型，取组织冰冻切片，CLSM下可见红色的实质内存在CD63-EGFP标记的多泡体，而无荧光标记的间质中也存在CD63-EGFP标记的外泌体，说明实质向周围环境释放外泌体。模型鼠门脉血涂片可检测到血液中有绿色的EGFP-Exo外泌体存在。模型鼠肝脏冰冻切片可见肝窦部位存在绿色的EGFP-Exo外泌体，说明结肠组织释放的EGFP-Exo外泌体循门脉血回流至肝脏，被肝脏中包括LSEC在内的吞噬细胞所摄取。进一步应用anti-CD146免疫磁珠自模型鼠分选出LSEC，置CLSM下观察，可见分离纯化的CD146* LSEC细胞摄取了CT26-DsRed/EGFP-Exo组织来源的EGFP-Exo外泌体。

相关产品：

负载人尿源干细胞外泌体人去细胞羊膜

负载白藜芦醇人多能干细胞外泌体

负载奥替普拉人多能干细胞外泌体

外泌体包载顺铂

载舒尼替尼外泌体

载帕唑帕尼外泌体

载阿西替尼外泌体

载索拉非尼外泌体

载卡博替尼外泌体

载卡依维莫司外泌体

载乐伐替尼外泌体

载贝伐珠单抗外泌体

载tPA外泌体

PEG-AA载体修饰装载有紫杉醇外泌体

牛奶来源外泌体包裹紫杉醇

RXYWX.2022.4.28