DiD；红色细胞膜荧光探针

DiD是DiI的结构类似物， 能快速稳定地与磷脂细胞膜结合，用于细胞追踪。激发和发射波长具显著的红色迁移，这一特征使其能够避光自发荧光和光毒性效应，以及适用于双色标记。

图1.DiD荧光探针化学结构

DiD红色细胞膜荧光探针基础信息

中文名：DiD细胞膜荧光探针红色;DiD细胞膜荧光探针;活细胞长期染色的红色荧光膜探针

英文名：DiD perchlorate；DiD;

CAS号：127274-91-3

结构式：CCCCCCCCCCCCCCCCCCN1C2=CC=CC=C2C(C1=CC=CC=CC3=[N+](C4=CC=CC=C4C3(C)C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)(C)C.[O-]Cl(=O)(=O)=O

分子式 ：C61H99ClN2O4

分子量：959.9

溶解度：DMSO溶解度50 mg/mL

性状：固体

储藏条件 ：4°C, 避光 * 溶液中 : -80°C, 6 月; -20°C, 1 月 (避光)

DiD细胞膜荧光探针操作说明（仅供参考） 

1. 染色液制备
   （1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
   【注】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
   （2）工作液制备：用合适的缓冲液稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
   【注】工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。
   2.悬浮细胞染色
   （1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
   （2）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
   （3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。
   （4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
   （5）重复（3）（4）步骤两次以上。
   3. 贴壁细胞的染色
   （1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
   （2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
   （3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
   （4）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
   （5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。
   4. 显微镜检测
   DiD，DiO，DiI，DiR滤光器的选择参见下表。 DiD染色可见红色荧光。

   
   5.流式细胞仪检测
   经DiD，DiO，DiI，DiR染色的细胞可分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

——biofount范德生物（货号：YZM019910）