实验操作喂饭教学—细胞复苏

细胞复苏

①清洗水浴锅，更换水浴锅中的水，打开水浴锅开关，并将水温调至37℃。

②穿戴手套和眼镜，做好防护措施，用长镊将细胞冻存管从液氮罐中取出，用干净塑料手套覆盖双手，必要时可以在冻存管口缠上封口胶，放入37℃水浴锅中快速融化，为防止水浴锅中水进入细胞冻存管中，可将细胞冻存管放入PE手套中进行快速融化，保持管帽高于水浴锅液面，同时轻轻摇晃细胞冻存管加快融化。

③待细胞冻存液完全融化后，用酒精纱布擦拭冻存管外部，避免污染。在超净工作台中取10 ml离心管，加入3 ml不完全培养基，将细胞冻存悬液迅速转移至离心管中，轻柔吹打悬液，室温800 rpm/min 离心5 min，弃去含二甲基亚砜（DMSO）的上清液。

④向离心管内加入3 ml 含10% FBS的完全培养基，轻柔吹打，使完全培养基和离心管底部的细胞沉淀充分混匀，重悬至细胞均匀分布且为单个细胞。将细胞悬液接种到细胞瓶，记录接种时间、细胞名称、细胞代数、细胞瓶编号、实验人员姓名等基本信息，放入恒温细胞培养箱内培养。24小时后在显微镜下观察细胞有无污染，是否贴壁，并更换培养基。

以上操作步骤仅供参考，本人保留一切权利。