哺乳动物细胞培养液上清纯化His-tag标签蛋白的实验心得

2020年新冠疫情爆发，抗体以及重组蛋白的研究成为热点，真核表达系统293F成为大家研究的热点。

     His-标签在蛋白纯化中使用广泛，但在真核表达系统中，由于大部分哺乳动物细胞或者昆虫细胞培养基中含有螯合剂成分，致使培养上清无法直接上镍柱，否则会出现脱镍（镍柱变成白色），蛋白无法纯化等问题。

可以用以下几种方法处理：

1、浓缩后透析置换缓冲液去除螯合剂；

2、先过离子交换柱、疏水柱等，然后过镍柱；

3、在确定目的蛋白耐酸的情况下，调至弱酸性后加入适当浓度CuSO4，结合螯合剂，然后过镍柱（下图为此方法处理后得到的结果）