间接ELISA检测IgG抗体

包被液（0.05M pH9.6碳酸盐缓冲液）：取NaHCO3 2.93g，Na2CO3 1.59g于900mL ddH2O中，搅拌至完全溶解，调pH值至9.6，定容至1L 。

洗涤液（PBST）：向1×PBS中加入0.5%的Tween-20。

封闭液：含5%（W/V）脱脂奶粉的PBST。

详细步骤

1）将商品化的重组 蛋白（1 µg/mL）包被于 96 孔 ELISA 板中，4 ℃

条件过夜；

2）PBST 清洗 ELISA 板 3 次后，每孔加入 200 µL 的封闭液进行封闭，于 37 ℃

条件孵育 2 h 后，用 PBST 洗板 3 次；

3）每孔加入 100 µL 梯度稀释的血清样品，于 37 ℃条件培养 2 h 后，用 PBST

洗板 5 次；

4）于各孔中加入 100 µL 的 HRP 标记的鼠二抗稀释液，在 37 ℃条件下孵育 45

min，随后用 PBST 洗板 5 次；

5）于各孔中加入 100 µLTMB，随后待孔内出现较深蓝色后加入 50 µL 终止液。

将板置于酶标仪中记录 450 nm 处的 OD 值。