BL21(DE3)甘油菌(蛋白诱导表达菌株)的使用方法及注意事项

产品名称：甘油菌(蛋白诱导表达菌株)

产品编号：D0337BL21(DE3)

产品包装：200μl

BL21(DE3)甘油菌，是收集生长在对数期的BL21(DE3)菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。可以直接划平板或小量、大量培养。本菌株适用于T7启动子(T7 promoter)调控目的基因表达的pET系列等原核表达质粒。

BL21缺失细胞质中的Lon蛋白酶(Lon protease)和胞外膜上的OmpT蛋白酶(OmpT protease)，能有效避免重组表达蛋白的降解，所以被广泛用作外源蛋白的表达菌株。

使用方法：

1.划平板接种：
取出BL21(DE3)甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。
a.用镊子和塑料枪头操作：镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200µl塑料枪头，蘸取少量BL21(DE3)甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头，以尽量和LB平板接近平行的角度，在不含抗生素的LB平板上连续作S形或Z形划动，再用一无菌的200µl塑料枪头，在原先的划线上以90º或120º角，再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
b.用接种环操作：将接种环在酒精灯上略略烧一下，使接种环处于无菌状态。微冷后，蘸取少量BL21(DE3)甘油菌，在不含抗生素的LB平板上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下，微冷后，在原先的划线上以90º或120º角，再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
2.直接培养：
BL21(DE3)甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，蘸取少量BL21(DE3)甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3ml LB的细菌培养试管内或装有100ml或更大体积LB的细菌培养瓶内。37℃，约200rpm培养过夜。
3.感受态细菌的制备
可以使用一步法感受态细菌制备试剂盒(D0301)、超级感受态细菌制备试剂盒(D0302)或其它方法进行感受态细胞。

注意事项：

使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。

为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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