外泌体修饰微小RNAs/RNA-338/miRNA/miR-221-3p/miRNA-126/microRNA-135a的制备

今天瑞禧生物小编为大家分享的是外泌体修饰微小RNAs/RNA-338/miRNA/miR-221-3p/miRNA-126/microRNA-135a的制备与研究过程，和小编一起来看看吧！

外泌体修饰微小RNAs的制备：

外泌体是一类介导体内生物信息分子传递的纳米级小囊泡",外泌体能在体内运载和传递生物信息分子,在免疫调节、心血管疾病和肿瘤等生理病理过程中发挥着重要的功能。外泌体可由体内各种活细胞分泌,体液中含量很高,每微升血清中外泌体数量可达3× 106其携带的RNA、蛋白质和脂类等生物信息分子会随疾病进展转归发生变化,是颇具临床诊断价值的循环标志物"。因此提取纯度高,干扰少的外泌体及其内容物用于后续临床诊断有重要的实用价值。本研究取健康人血清为样本,利用不同外泌体及外泌体RNA( exo-RNA)提取方法组合提取外泌体及其内容物,并对提取所得外泌体和其内蛋白质、RNA进行分析和比较,选取最适于提取外泌体与exo-RNA的实验方法。

评价超高速离心法、ExoQuick 与TEI试剂盒提取血清中外泌体的价值。方法方法学比较。收集2015年8至11月南方医科大学南方医院检验科健康者3名,采集静脉血至采血管,4℃静置12 h使其自然凝固后离心取上清液为血清,采用超高速离心法、ExoQuick 与TEI试剂盒提取血清中外泌体,通过透射电子显微镜,蛋白印迹技术和NTA颗粒粒度分析仪检测外泌体形态结构,蛋白表达量和浓度与粒径分布,评估外泌体提取效率;采用超高速离心法＋Trizol IS法、ExoQuick+SeraMir TEI+TER与ExoRNeasy试剂盒提取法分离3例血清中外泌体总RNA ( exo-RNA ) ,利用Agilent生物分析仪分析RNA片段分布,实时荧光定量PCR仪检测 miRNA表达水平。组间蛋白浓度与miRNA表达量的比较采用方差分析。

外泌体提取方法中,比较外泌体浓度和其蛋白浓度,ExoQuick 与TEI试剂盒提取浓度高于超高速离心法;超高速离心法提取外泌体同时表达CD9,CD63和TSG101蛋白,而ExoQuick 与TEI试剂盒提取外泌体仅表达TSG101。外泌体RNA提取方法中,不同方法影响RNA片段分布和 miRNA表达,未影响miRNA相对表达趋势;ExoRNeasy 提取RNA条带浓度较高,各miRNA表达水平较高;TEI+TER法未见明显RNA条带,样本中各miRNA表达水平稳定;超高速离心法＋Trizol LS法与ExoQuick + SeraMir法提取RNA可见范围较广的低浓度条带,此两法提取RNA中各miRNA表达无明显规律。结论﹑外泌体提取方法中传统超高速离心法适用于蛋白组学方面研究,而ExoQuick 与TEI试剂盒提取方法适用于血清等稀缺样本外泌体制备。

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RXYWX.2022.4.25