WP1066, JAK/STAT3抑制剂

WP1066, JAK/STAT3 inhibitor 是一种细胞渗透性 STAT3 抑制剂，当以 10 µM 的浓度给药时，WP1066 可指导 U87-MG 和 U373-MG 恶性胶质瘤细胞中组成型磷酸化 STAT3 的去磷酸化和核输出。WP1066 还诱导 U87-MG 细胞凋亡（IC50 = 5.6 µM) 和 U373-MG (IC50 = 3.7 µM) 细胞。WP1066 具有口服生物利用度，可穿过血脑屏障，并表现出体内活性，包括 CD80 和 CD86 上调所示的免疫激活和 诱导效应 T 细胞增殖。WP1066 除了诱导癌细胞凋亡外，WP1066 还能抑制小鼠血管损伤后的血管平滑肌细胞增殖，并防止大鼠脑损伤后的癫痫发作。

体外研究

WP1066 能显著抑制携带JAK2 V617F突变亚型的HEL细胞的生长，这种抑制是剂量依赖型的，它的IC20, IC50和 IC80分别是0.8, 2.3 和3.8 μM。在表达JAK2 V617F突变亚型的急性白血病HEL细胞中0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 或 4.0 μM浓度的WP1066则可以抑制JAK2, STAT3, STAT5和ERK1/2的磷酸化，但不会抑制JAK1 和JAK3的磷酸化。[1] WP1066的浓度在0.5 到 3.0 μM之间以剂量依赖的方式抑制从病人体内获得的AML形细胞以及AML 细胞系 OCIM2和K562的增殖。在OCIM2 和K562细胞中，WP1066浓度在0.5, 1.0, 2.0, 3.0或 4.0 μM时，剂量依赖地降低JAK2 和pJAK2的蛋白水平，同时STAT3, STAT5和AKT的磷酸化水平。2 μM浓度的WP1066可以通过诱导处在细胞周期G0-G1期细胞的积累抑制OCIM2细胞增加。1, 2或 3 μM的WP1066能激活procaspase-3，裂开的PARP，剂量依赖地引起OCIM2 和K562细胞的细胞凋亡。[3] 5 μM浓度的WP1066能阻止STAT3磷酸化，2.5μM浓度时能显著抑制Caki-1和 786-O肾癌细胞的生存和增殖。5 μM WP1066还能抑制Caki-1和 786-O肾癌细胞中HIF1α 和 HIF2α的表达及VEGF的产生。[4]

体内研究

每日口服40 mg/kg剂量的WP1066，连续服用19天，能显著抑制Caki-1移植小鼠的肿瘤生长，同时磷酸化的STAT3免疫染色减少，CD34阳性 血管长度降低。 [4]

细胞实验

Cell lines: 携带JAK2 V617F突变亚型的HEL细胞系 , HL60, K562, Raji, PEER, CMK, TM 和RHN 细胞系
Concentrations: 0 - 6 μM
Incubation Time: 72 小时

实验方法:
利用基于MTT的细胞增殖/细胞毒性分析系统进行MTT检测。简单的说就是将对数生长期的新鲜的低密度外周血细胞核不同的细胞系用含有10% FCS的RPMI 1640洗两次，再进行血细胞计数器计数。用台盼蓝(0.1%)染色方法估算细胞的存活性。在96孔板中取相等数量的存活细胞(5 × 104 每孔)用含10% FCS的RPMI 1640培养基将体系稀释到100 μL，不加或加入依次增加浓度的WP1066，在含5% CO2的空气和37℃的培养条件下继续培养72小时。每个条件下的实验都做三组对照。之后每孔加入20 μL CellTiter96 One Solution Reagent。然后在37℃，5% CO2中继续孵育60分钟。孵育后立即用酶标仪检测490 nm波长的吸光度。