细胞介绍

从表观正常的成年雌性可卡犬中建立了细胞株MDCK，从中克隆建立了狗上皮样细胞株Super Tube。当维持高细胞浓度时，Super tube形成大量的小管(据报道，24孔板的每孔铺7x105细胞，３天内就能形成小管)。要形成小管，细胞需要每天两次换液以提供足够养分。与原始细胞株相比，Super Tube的c-AMP的检测水平低得多，在forskolin刺激下读出的腺苷环化酶水平也低；它的跨上皮抗性也比Super Dome 和 MDCK都低。

基本信息

细胞别称：MDCK supertube;SuperTube

细胞来源：正常犬肾

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

安全等级：BSL1

包装规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

推荐换液：2~3次/周

传代比例：1:3~1:4

保藏机构：ATCC;CRL-2285

培养保存

培养体系：DMEM/F12(TM025)+0.05mM NEAA+10%FBS(TS500)

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%；温度：37℃

冻存条件：55% 基础培养基+40%FBS(TS500)+5%DMSO

传代步骤

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。

冻存步骤

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为5%，细胞密度不低于1x10(6)/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

（以上操作均以T25瓶培养细胞为例）

细胞用途

仅供科研使用。