艾美捷CompTech丨40 %甘油中的C1q蛋白功能和测定
艾美捷CompTech40 %甘油中的C1q蛋白：
名称： 40 %甘油中的C1q蛋白
编号： A100
规格： 1000 µg/vial
浓度： 1.0 mg/mL (实际浓度见分析证书)
类型 冷冻液体
活动： > 1,000,000 C1H50 units/mg
纯度： > 98%的SDS页面
缓冲区： 40%甘油，10 mM HEPES，300 mM氯化钠，pH 7。2
消缺系数。 A28 0 nm = 为 0 . 6 8 , 1 . 0 m g/m l
分子量： 410000Da ( 18链)
防腐剂： 无，0.22µm过滤。
存储： - 7 0oC或以下。避免冻融。
根源 正常的人类血清 (经认证的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗体检测均为阴性) 。
预防措施 在处理人类血液制品时要采取常规的预防措施。
一般说明
从C1r和C1以及其他稳定蛋白中分离出来的C1q往往很容易聚集。由于它在许 多研究实验室中被分离和研究，许多缓冲液被用于稳定浓缩的C1q和防止聚集。大约 一半的科学家喜欢高盐，另一部分科学家喜欢储存缓冲液中40%的甘油。因此， CompTech在高盐缓冲液A099和高盐缓冲液A100加40%甘油中均销售1 mg/mL的C1q)。 该公司没有检测到在功能活性、存储稳定性或聚集性方面的可测量的差异，但在研 究界仍然存在强烈的偏好。
C1q是从正常人血浆中纯化出来的。C1q是C1复合物的一部分，该复合物是级 联反应中的第一个补体成分，称为经典补体途径。C1实际上是三种不同蛋白质 (C1q 、C1r和C1) 结合在钙依赖复合物中的非共价组装。C1q有6个延伸的臂，每个臂的末 端都有一个结构域，与免疫球蛋白的Fc结构域结合。当抗体与抗原结合形成免疫复合 物时，它们聚集在一起，使C1q的六个臂中的两个或多个与抗体的Fc结构域结合，如 IgG或IgM。多个臂与免疫复合物的结合导致复合物中的两个C1r蛋白 (蛋白酶酶原) 自动激活产生两个C1r蛋白酶，切割并激活复合物中的两个c1蛋白酶酶原。活化的C1s 裂解补体成分C4，释放C4a，并启动C4b与活化表面的共价附着在活化表面。激活的 C1s也能切割C2，C2的较大片段与表面附着的C4b结合，形成C4b，C2a，这是经典途径 的C3/C5转化酶。
物理特性和结构
C1q是一个由18个多肽链组成的高分子量复合物。C1q的六个臂中的每一个都 包含三条链，一条a链 (26000道尔顿) ，一条B链 (25000道尔顿) 和一条C链 (2400 0道尔顿) 。这三条链被卷曲成类胶原蛋白
三螺旋结构大约超过其一半的长度。这个胶原蛋白区域的一半形成了一个中心核心， 在这里所有的18条链聚集在一起。这些链通过A-B和C-C模式中的二硫化物连接在这个 核心中。在胶原蛋白区域的中心有一个弯曲，使手臂彼此向外伸展。胶原臂远端的球 状头具有免疫球蛋白Fc结构域的结合位点。
C1复合物由一个C1q分子 (410000道尔顿) 、两个C1r分子 (92000道尔顿) 和 两个C1s分子 (86000道尔顿) 组成。该复合物在钙的存在下是稳定的，但如果钙被去 除，很容易解离。当C1被激活时，C1r和C1s亚基由于蛋白水解激活而分别分裂成两个 链分子。因此，C1的SDS凝胶图样非常复杂。
功能
C1q的生物学功能在上述一般描述和物理特性部分中描述。C1q的功能活性可以 用C1q耗尽的血清 (CompTech #A300) 和EA细胞 (CompTech #B200) 来检测。这些检 测方法对C1q极其敏感，在测量EA细胞裂解的检测方法中，通常产生50%的裂解，小于 2 ng的裂解(Dodds，A。W.和Sim，R。B. (1997) ；摩根，B。P.
(2000)).
测定
经典途径活性的单位是CH50。一个类似的单元，C1qH50，被用来定量C1q的活 性。一个C1qH50单元是溶解3 x 10的50%所需的功能性C1q的量7当一定量的C1q (Comp Tech #A099或A100) 与5-20µL的C1q-Dpl在GVB中孵育时，EA细胞 (抗体致敏的绵羊红 细胞 (CompTech #B200) ) ++ (比较技术#B100) ，总体积为500µL，30 min，37 minoC.这个数量的C1q表明了对C1q检测的敏感性，通常为1 ng C1q与10µL C1q-Dpl (Dodds，A。W.和Sim，R。B. (1997) ；摩根，B。P. (2000)).有关批次的具体值， 请参见分析证书。
应用程序
C1q用于覆盖ELISA板，以捕获和定量临床样本中的免疫复合物。许多商业公司 销售用于免疫复合物检测和定量的诊断试剂盒。这些试剂盒是基于C1q与免疫复合物 的良好结合的能力，但不与单体免疫球蛋白的显著结合。
参考文献
Dodds, A.W. and Sim, R.B. editors (1997) Complement. A Practical Approach (ISBN 019963539) Oxford University Press, Oxford.
Morgan, B.P. ed. (2000) Complement Methods and Protocols. (ISBN 0-89603-654-5) Humana Press, Inc., Totowa, New Jersey.
Ross, G.D. (1986) Immunobiology of the Complement System. (ISBN 0-12-5976402) Academic Press, Orlando.
Rother, K., Till, G.O., and Hӓnsch, G.M. (1998) The Complement System. (ISBN 3-540-61894-5) Springer-Verlag, Heidelberg.
