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组织培养常用的培养基和组培仪器

2022-05-30 09:29 作者:济南腾昊组培设计建设  | 我要投稿

MS培养基

MS培养基是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度,能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高,在配制、贮存和消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不会影响离子间的平衡。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织,也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养,其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此,一般情况下,不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比,MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的显著特点。

 

B5培养基

与其他培养基相比,它的主要特点是含有较低的铵,而铵这一营养成分可能对有些培养基有抑制生长的作用。当愈伤组织和悬浮培养中对B5培养基与MS培养基进行对比培养试验时,发现有些植物的愈伤组织和细胞培养物在MS培养基上生长得好,有些在B5培养基上生长得更适宜。

 


N6培养基

为水稻的花药培养设计,成分简单,硝酸铵含量高,不含钼,用于花药(谷物)培养。

 

White培养基

为培养番茄根尖培养设计,无机盐浓度低,属于低盐培养基。适用于生根培养,成熟胚胎培养,后作了改良,多用于本草植物。


 

常用培养基母液成分及配置过程

 

培养基母液的各种成分包括大量元素、微量元素、Fe盐、有机成分、肌醇、激素等。


大量元素母液的配制(10X,1 L)

 

微量元素母液的配置(100X,0.5 L)

 

Fe盐母液的配置(100X,0.2 L)


 

有机成分母液的配置(100X,200ml,无肌醇)

肌醇母液配置(100X,200ml) 

 

激素母液的配置


注意事项 

 

配制大量元素母液时,某些无机成分如Ca2+、SO42-、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应,产生沉淀物。为避免此现象发生,母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解,药品采用等级较高的分析纯,各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合,混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42-、Mg2+和H2PO4-等离子错开混合,速度宜慢,边搅拌边混合。CaCl2·2H2O要在最后单独加入,在溶解CaCl2·2H2O时,蒸馏水需加热沸腾,除去水中的CO2,以防沉淀。另外,CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾,操作时要防止其溢出。

 


使用电子分析天平时注意不要把药品撒到称盘上,用完以后,用吸耳球将天平内的脏物清理干净。

 

在配制铁盐时,如果加热搅拌时间过短,会造成FeS04和Na2-EDTA鳌合不彻底,此时若将其冷藏,FeSO4会结晶析。为避免此现象发生,配制铁盐母液时,FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合,并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min),调pH值至5 .5,室温放置冷却后,再冷藏。

 

由于维生素母液营养丰富,因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液,有效浓度降低,并且易给后期培养造成伤害,不宜再用。避免此现象发生的方法是:配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素,并贮存在棕色无菌瓶中,或缩短贮藏时间。

 


所有的母液都应保存好,若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。

 

计算时,要考虑周全,无论是配置母液时的计算还是配置培养基时吸取量的计算,都要考虑周全,尤其是母液配置时的计算,因为贯穿以后的实验,必须准确制备。



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