不同种类的PCR探针如何工作-双杂交探针

在双杂交探针中，没有猝灭剂。 相反，有两种寡核苷酸，一种携带供体荧光团，另一种携带受体荧光团。

供体荧光团：一种被特定波长激发的染料。 这种染料将其能量贡献给受体荧光团。

受体荧光团：受体荧光团是一种染料，它从另一个荧光团（供体荧光团）接收能量，并利用该能量，受体荧光团发出荧光。 供体和受体荧光团都必须接近才能发生这种情况。

图 1. 双杂交探针在供体和受体荧光团的基础上工作，而不是淬灭报告基因。

双杂交探针如何工作？

两个寡核苷酸，每个携带一个荧光团，用于双重杂交。

这些寡核苷酸及其荧光团接近目标序列。 我们可以说目标互补序列的一部分在供体中，另一部分在受体荧光团中。

然后，发生称为荧光共振能量转移（或 FRET）的过程。 FRET 是一种依赖于距离的物理过程，它通过偶极-偶极耦合过程将能量从激发的分子（或供体荧光团）转移到另一个分子（受体荧光团）。

在这里，供体荧光团被激发并将其能量转移到受体荧光团，使其发出荧光。 供体与目标序列结合，当它靠近受体时，它会转移能量，使受体荧光团发出荧光。

图2. 双杂交探针需要供体和受体荧光团。 两个探头必须彼此紧密接触。 这种接近允许电子从供体转移到荧光团，然后受体发出荧光。

该探针的优点是对目标序列具有特异性。 缺点是供体和受体荧光团的寡核苷酸序列设计复杂。