BODIPY TR-Ceramide,红色高尔基体荧光探针

BODIPY TR 神经酰胺(BODIPY TR-Ceramide, Golgi-Tracker Red)也被称为 高尔基体红色荧光探针，是一种神经鞘脂(sphingolipid)类的红色/橙色荧光染料，一般应用于染色活细胞中的高尔基体。荧光波长：在 589 nm 处具有峰值激发，在 616 nm 处具有峰值发射(Ex/Em=589/617nm)。

BODIPY TR 神经酰胺活细胞染色方案:
一、BODIPY TR 神经酰胺 工作液的配制
1. 第一次使用本品，可将 BODIPY TR 神经酰胺 (0.5mM)根据单次用量分装，比如10µl/管。本品一管含30µl（总量：1mg），由于本身量微少，务必低速离心后再开盖，然后用低吸附枪头吸取母液，并分装-20℃冻存，避免反复冻融。
2. 吸取少量 BODIPY TR 神经酰胺 (0.5mM)按照1：100的比例用Golgi-Tracker稀释液来稀释，比如：取10µl BODIPY TR 神经酰胺 (0.5mM)加入到1ml Golgi-Tracker稀释液中，混匀后即为BODIPY TR 神经酰胺工作液，工作液请现配现用。

※ 【注意事项】：BODIPY TR 神经酰胺 的工作浓度可以根据实际情况进行适当调整，推荐的稀释比例调整范围为1:50~1:200。

二、活细胞高尔基体的荧光标记
1. 去除细胞培养液，用适量的溶液如Hanks平衡盐溶液（含钙镁）或其他缓冲液来洗涤生长在盖玻片上的细胞。
2. 去除洗涤液，加入新鲜配制的 BODIPY TR 神经酰胺 染色工作液，4℃孵育30min。
3. 吸走染色液，用冰浴预冷的细胞培养液洗涤细胞3次左右，换新鲜培养液37℃再孵育30min。
4. 用新鲜培养液再洗涤一次，随后用荧光显微镜或共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到高尔基体呈明亮的强荧光染色，而细胞内的其他膜系统呈比较微弱的荧光染色。

图：BODIPY TR Ceramide 应用于小鼠原代脾细胞 48 小时。染料直接添加到介质中，应用染料后 2 小时、8 小时、14 小时、24 小时和 48 小时拍摄图像。图像使用了伪红色（可参见其他图像以了解通常橙色）