Elabscience直播回放_CCK-8实验全方位深度解析

• 对数生长期：细胞生长最快，状态最好

• cck8来制作生长曲线来确定细胞是否处于对数生长期
• cck8横坐标：培养时间，纵坐标：od值

• ic50

• 活细胞越多，脱氢酶越多，黄色越多

• NC组复孔取平均值

• 空白组：排除培养基与cck8的影响

• ic50: 1- 存活率（抑制率）

• MTT：发明更早，产物没有水溶性，需要进一步DMSO溶解
• CCK8：产物无毒无害，水溶性

• 实际接种量：建议在进行CCK8检测的时候长得最快的那组细胞不能长满，仍有增殖的空间（防止接触抑制）
• 移液器的使用：注意枪的气密性
• 排枪：注意查看枪液面是否平齐
• 单枪：注意中间尽量不要换枪头
• 让每个孔细胞的数量一致
• 空白组的目的：空白组只有培养基+cck8，排除培养基对cck8的影响。注意设置复孔（建议>=3个）
• 细胞混匀：接板的时候注意边加边混匀（1.手摇管子；2.枪吹打），防止细胞的沉降
• 铺板均匀：1.接完96孔板的时候，放回培养箱，不要晃，平稳的拿，开门关门要轻柔；2.最好不要十字摇或八字摇
• 减少液体蒸发：1.接板的时候的，操作迅速，因为安全柜或通风柜会蒸发液体；2.最外一圈加pbs；3.培养箱最中间蒸发最少，尽量往中间放
• 1.测量不同时间点需要接不同的板，，减少污染；2.缺氧和加压实验，也是要分开接不同的板

• 氧化还原性：考虑加入的物质是否有氧化还原性（因为cck8的原理）；有氧化还原性的物质，注意加入cck8之前先换液；
• 如何知道自己的物质是否存在氧化还原性？通过设置调零孔（只加培养基+药物+cck8）
• 药物颜色：药物就是黄色就会导致cck8的颜色。只要加入cck8前换液
• PH改变：培养基里面有酚红，因为酚红在ph为酸性的时候，导致培养基变成黄色
• 金属离子：终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度为10mM，将会100%抑制

换液总体原则：快速轻柔，非必要不换液体

• 快速：目的减少蒸发
• 轻柔：枪不要把细胞损伤或吸走

换液：一部分一部分换，防止前面的细胞蒸发导致细胞死亡

药物可能是有机溶剂溶解的，注意有机溶剂的加入量 < 5/1000，(一个孔200ul，有机溶剂最多加入量： 200 * 5/1000 = 1ul)

水作为溶剂：通常<= 1%(水最多加入量：200 * 0.01 = 2ul)

最好做个溶剂对照，排除溶剂的影响

• cck8孵育时间1-4h；通过od值间接判断。因为加入的cck8是有限的，酶活性是不变的，随着时间的延长，导致cck8都被消耗，无法进行比较，建议od在0.2-1.0，这个范围内的线性关系；但是细胞之间总是有差异，最好不要高的太高，低的太低
• 样本混匀：不建议用酶标仪的混匀功能，它的震动混匀效果通常不是很好。

• 本质就是OD值

• 酶标仪平时常用中点法，如果没有混匀，但是测得出来的复孔差异大

• 处理时间不是越长越好