优宁维转染全攻略

转染——是指将外源基因如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。

 

目前常见的细胞转染方法有以下几种：

1、化学介导法：

（1）阳离子脂质体：脂质体是一种人工的脂双层膜。可以将DNA包裹到亲水性核心内部，也可将其络合到磷脂片层。

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（2）阳离子聚合物：带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过内吞作用进入细胞。阳离子聚合物和阳离子脂质体最大的区别在于阳离子聚合物不含疏水部分而完全溶于水，可以方便地进行化学修饰，且不会像脂质体一样破坏细胞结构，所以相对毒性较低。

 

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（3）非脂质体的脂质（Non-liposomal lipids）：脂质体技术的未来发展方向——革新配方成分形成胶束结构而非简单的双层膜结构，令核酸传递更有效率而且细胞毒性也显著降低。能够转染各种贴壁细胞，也可用于悬浮细胞，毒性较阳离子脂质体更小。

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2、物理介导法：

电转染：也叫细胞电穿孔 (electroporation)，在瞬间强大电场的作用下，溶液中细胞的细胞膜被破坏，通透性增高，带电的外源物质以类似电泳的方式进入细胞膜。电场使DNA等物质进入细胞膜后只能停止在细胞膜附近，随后细胞本身的机制可以允许这些物质到细胞核等处。传统转染方式很难转染原代细胞，这种情况下电转染就能够从根本上解决此问题，无论是原代细胞、干细胞、还是难转染细胞系，都可以重复出很高的转染效率。

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3、生物介导法：

病毒介导法：对于上述几种方式都不能实现转染的细胞，可采用病毒转染。病毒介导法转染效率特别高，尤其是针对难以转染的原代细胞、活体细胞。病毒转染主要包括以下几个步骤：构建载体、包装提纯病毒以及感染靶细胞

目前，腺病毒、逆转录病毒和慢病毒载体已广泛用于哺乳动物细胞体内外的转染实验中。以慢病毒为例，其包装系统由两部分组成，即包装成分和载体成分。将包装成分与载体成分的多个质粒共转染包装细胞，即可在细胞上清中收获携带目的基因的复制缺陷型慢病毒载体颗粒。包装好的假病毒颗粒可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。

不同病毒载体形式对比：

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杨玉倩（分子产品专员）

13914767602（可加微信）

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