细胞培养避坑指南

细胞培养过程中时常会出现这样或那样的问题，别小看细胞培养,里面却蕴含着大学问。通过与使用者的沟通，你会发现了很多可以避免的问题发生，下面对细胞培养过程中存在的几大误区做详细解析。

一. 培养基的选择

XX实验室培养XX细胞用的就是这个培养基，我用一样的就可以。

选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：

1. 首选：建立该细胞株所用的培养基

2. 参考：文献

3. 尝试：实验室常用的培养基

4. 按需：根据细胞株的特点、实验的需要来选择

5. 最客观：用多种培养基培养，根据实际效果选择，但较繁琐

二. 长期使用抗生素，以对抗污染

1. 细胞培养时不应常规使用抗生素

2. 连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生，导致轻度污染持续存在，一旦将抗生素从培养基中去除，这种轻度污染最终将发展成大规模污染

3. 连续使用抗生素会掩盖支原体感染及其他隐性污染

4. 有些抗生素会与细胞发生交叉反应，干扰您研究的细胞过程

三. 培养基中的谷氨酰胺容易降解，需要不断补充

如果正确使用，一般不需要补加

1. 4℃避光保存

2. 分装，不要反复预热

3. 含有谷氨酰胺的培养基，开封后应尽快用完

四. 培养基误存于-20℃，溶解后继续使用

1. 在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基再次融化后，有的盐可能无法重新溶解，从而导致培养基营养成分和渗透压改变，培养细胞时，容易细胞破裂而死亡。

2. 建议丢弃该培养基,重新购买新的培养基用于细胞培养。

3. 培养基储存条件为2-8℃，一般保质期3个月。

五. 常见细胞系无需检测血清批次，可以直接切换

1. 血清来源于动物，组成成分有1000种左右，每个批号的组分和组分含量都是不确定的，批间差异是可能存在的

2. 如果某一个批次血清使用效果较好，记住批号，订货的时候给予说明

3. 如果需要换不同批号的血清，提前查询COA文件，寻找测试结果接近的批次

4. 先订购一瓶试用，试用成功之后再大量订购该批号血清

六. 血清灭活以后使用效果更好

血热灭活的血清对大多数细胞而言是不需要的，高温处理可能影响了血清的品质，造成细胞生长速率的降低，经过热处理的血清，沉淀物增多

七. 血清灭活以后使用效果更好

1. 血热灭活的血清对大多数细胞而言是不需要的高温处理可能影响了血清的品质，造成细胞生长速率的降低经过热处理的血清，沉淀物增多

2. 灭活补体系统补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞，刺激平滑肌收缩等

3. 在免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清

4. 如何正确进行血清热灭活？热灭活是指将血清于56℃处理30分钟，灭活血清中的补体

八. 原代细胞的培养及操作与传代细胞一样

1. 与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。

2. 当细胞传代时，使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外，记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶，因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。

3. 通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

4. 原代细胞对解冻过程非常敏感，因此将小瓶置于37℃水浴中，保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶，并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪，以便可以立即用于接种细胞，并置于培养箱中。

5. 我们不建议在解冻后离心细胞，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住，在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。

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