细胞质荧光探针——FDA&CFDA

FDA（二乙酸荧光素）

二乙酸荧光素 (FDA) 是一种可用作活力探针的细胞可透过性酯酶底物，可测量激活其荧光所需的酶活性和使其荧光产物保留在细胞内所需的细胞膜完整性。被细胞内酯酶水解后，该 AM 酯会产生荧光素。二乙酸荧光素 (FDA)是一种非荧光疏水性荧光素衍生物，可以通过细胞膜，随后细胞内酯酶水解双乙酸酯基团，产生高度荧光的产品荧光素。  Fluorescein diacetate 是一种细胞渗透性的酯酶底物。Fluorescein diacetate 可作为人谷胱甘肽硫转移酶 Pi (hGSTP1-1) 的荧光底物。荧光 :λex 495 nm, λem 520 nm。

图1.FDA（二乙酸荧光素）光谱图

FDA使用案例（FDA-PI染色）

图2.通过荧光素二乙酸盐碘化丙啶（FDA-PI）染色确定的细胞活力。用FDA-PI原位对A549细胞进行双染色，并使用不同的滤光片（ϫ100）在荧光显微镜下拍照。活细胞染成绿色（A），而同一电场下的死细胞染成红色（B）。这是一个展示该方法论的代表性领域。

CFDA（5-羧基荧光素二乙酸酯）

5-羧基荧光素二乙酸酯是一种重要的染色剂。渗透完整细胞膜的非荧光疏水剂。在细胞中，5-羧基荧光素二乙酸酯被酶水解成亲水剂，强荧光5-羧基荧光素。荧光 :λex 290± 3 nm in methanol; λex 492± 3 nm, λem 520 ± 4 nm in Buffer pH 9。

图3.cFDA染色乳酸杆菌粘附在通过荧光显微镜观察到的肠上皮上（放大倍数40）。菌株258接种后一小时A-十二指肠;菌株231接种后1小时B-空肠;C-回肠阳性对照后4小时罗伊氏乳杆菌接种D-盲肠菌株206接种后4小时。