葡聚糖凝胶C-25

葡聚糖凝胶C-25（CM Sephadex C25）用于离子交换色谱、阳离子交换介质、蛋白质色谱、分离介质和树脂。葡聚糖凝胶C-25是范德生物自主研发的一种新型高度交联的葡聚糖层析介质  ， 具有高流速、低反压、高动态载量及良好的化学稳定性。葡聚糖凝胶C-25方便进 行规模放大， 可以缩短生产时间， 提高生产效率， 降低大规模生产成本。

葡聚糖凝胶C-25使用方法:

葡聚糖凝胶C-25是颗粒状，使用时需要溶胀，其溶胀比取决于所使用的缓冲溶液，不同溶液中的溶胀比不同，而且存在较大差异。溶胀时不能使用磁力搅拌，否则易导致凝胶破碎。

※ 预处理:

称取所需量的葡聚糖凝胶C-25，置于 50~100 倍蒸馏水或者上样平衡液中，溶胀，室温 条件下一般需要溶胀 1~2 天，沸水中一般需要 2 小时。

按每克葡聚糖凝胶C-25加 0.5M HCl 15ml 的比例，将葡聚糖凝胶C-25浸泡于 0.5M HCl 中， 搅匀， 静置 30 分钟， 装入布氏漏斗（垫有 2 层滤纸）中抽滤， 并反复用蒸馏水抽洗至 pH

呈中性；然后以 0.5M NaOH 同上操作过程处理， 最后以 0.5M HCl 再处理一次。

※ 装柱

装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度 ，凝胶装柱前需要脱气 。

※ 平衡

使用 2~5 倍柱床体积的上样平衡液平衡柱子， 务必使流出液的电导和 pH 同上样缓冲液的

电导和 pH 完全一致。

※ 上样

根据目标产物浓度和凝胶的载量确定上样量 。

※ 清洗

上样完毕后，再使用上样缓冲液平衡柱子，清洗掉不结合的蛋白和杂质，直至流出液的电 导和 pH 同上样缓冲液的电导和 pH 完全一致。

※ 洗脱

使用增大缓冲液中盐离子浓度或者增加 pH 的连续洗脱或者梯度洗脱。

※ 再生

在柱上先用 1~2M NaCl 洗去柱上的杂蛋白，再用蒸馏水洗去柱中盐。然后按预处理过程将葡聚糖凝胶C-25再处理一遍即可 。

※ 存储

葡聚糖凝胶C-25干粉保存于4~25℃ 、干燥 、通风、清洁处；溶胀后的凝胶保存于4~8℃

20%乙醇溶液或 0.01M NaOH 中 。

※ 运输

运输中避免日晒、雨淋、重压， 严禁与有毒、有害物品混运。

葡聚糖凝胶C-25使用注意事项:

a. 柱的选择：从理论上说， 只要柱足够长，就可以获得理想的分辨率，但由于层析柱流 速同压力梯度有关，柱长增加使流速减慢， 峰变宽，分辨率降低；柱的直径增加，使液体流动 的不均匀性增加，分辨率明显下降。

b. 纯化过程必须严格控制洗脱缓冲液的 pH 及离子强度。样品与葡聚糖凝胶C-25必须 用洗脱缓冲液彻底平衡后，才能进行柱层析。

c.  所装的柱床必须表面平整， 无沟流及气泡，否则应重装 。

4. 洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。

5. 上样的体积要小， 浓度不宜过高。

6. 加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。