CCK-8

原理：

操作步骤：

1.制备细胞悬液，计数。

我采用的方法是细胞计数板计数，直接用计数仪会方便一点

1）制备细胞悬液——贴壁消化离心重悬混匀，悬浮细胞离心重悬混匀（我是10cm皿，约铺满百分之七八十后，1ml培养基重悬，然后取10ul+90ul培养基）

2）擦拭干净计数板，在上下两个计数池的盖玻片的边缘滴上一滴细胞悬液，令其虹吸进入计数池。强调动作稳定，勿推动盖玻片（我是取10ul在红标地方打出即可，绿标表示盖玻片）

3）显微镜下计数：8个格分别计数，取平均值A（计上不计下，记左不记右）

4）计算细胞密度

一个大格体积是0.1mm³，原培养基细胞密度=A个/0.1mm³X10=10A万个/ml

2.细胞活性检测

1）在96孔板中接种细胞悬液，每孔约100μl（每个孔里约1000个细胞），同样的样本可做3个（若干个）重复。

如果一个样本做三个复孔做7天

我就需要21000个细胞，也就是21000/10A万=Bml=Cul，补充至2100ul，加孔即可

2）将培养板放入培养箱中预培养一段时间（37℃, 5%CO2），细胞贴壁需要大约2-4h，如果是悬浮细胞，该步骤可以省去。
3）每孔各加入10μl CCK-8溶液，由于加入的CCK-8量比较少，可能会因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀，或者直接配置含10%CCK-8的培养基，以换液的形式加入。另外注意，加样的过程中尽量不要产生气泡。

加10ul我怕不能混匀，于是我按照是将培养液吸出,将配置的cck8溶液加入110ul（按照10ulcck8和100ul培养基来配置）
4）将培养板放入培养箱中孵育1-4h。因为细胞种类不同，形成的formazan的量也不一样，所以如果显色不够的话，可以延长培养时间，特别是血液细胞形成的formazan很少，需要较长的显色时间（5-6h）。
5）酶标仪测定450nm处的吸光值（OD）。
6）若暂时不测定OD值，可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，室温下避光保存，这样可以保证OD值在24h内不发生变化。

然后每天同一时间测一下OD值，，七天做完就可以做折线图啦

目前关于CCK8我只做了细胞活性检测，后面做了再补充