DNA Ladders 故障排除(阶梯模糊或丢失)
DNA ladder 可能会模糊或丢失,因为孔中加载的 DNA ladder 量很少,它已变性或降解,或者 DNA ladder 可能已从凝胶中流出。 此外,一些解析不佳的波段最终可能会与其他波段合并。
首先,微弱的 DNA ladder 表明您的凝胶上至少有 ladder,但在制备凝胶时上样量或浓度不够。
完全缺失的 DNA ladder 可能表明忘记加载 ladder 或 DNA 片段从凝胶中跑掉了。
从凝胶中流出的 ladder 意味着凝胶运行时间太长,片段从凝胶中迁移出来。 可能是 DNA 片段从凝胶中跳出进入缓冲液,或者它们卡在凝胶的边缘。
您的 DNA 片段从凝胶中流出的标志是您可能会在凝胶顶部发现条纹状的斑点并且不再有条带。 这可能意味着您的 DNA 片段可能在缓冲溶液中。 在其他情况下,您会在凝胶的最末端发现条带,或者在该边界处有条带堆积。 无论哪种情况,优化的运行条件都足以解决此问题。
缺失的 DNA ladder:
缺失的 DNA ladder 可能表明您忘记加载它。 一个好的做法是在样品之后加载 DNA ladder,并且在准备电泳时始终有一个清单。
确认您加载了 DNA ladder。 为此,请指定一个孔来装载ladder,并在您完成样品装载后验证它是否已满。 一个很好的迹象是孔将被 ladder 的染料染色。 DNA ladder 中的加载染料可以是蓝色、紫色或红色。
ladder可能已降解。 使用无 DNase 的移液器吸头加载 DNA ladder。
您的凝胶电泳时间可能过长,导致 DNA ladder 从凝胶上跑掉。 减少运行时间以避免DNA ladder跑出泳道。
图1:缺失的 DNA ladder
模糊的DNA ladder:
图2:模糊的DNA ladder