基因泰克 LY6G6D/CD3双抗剑指结直肠癌

2023-08-24 15:51 作者:吉满生物科技 0人读过 | 我要投稿

目前，PD-1等多款免疫检查点抑制剂在dMMR或MSI-H转移性结直肠癌（mCRC）的治疗中显示出了临床疗效。然而，其对MSS或MSI-L的结直肠癌患者疗效甚微，而且大多数mCRC患者的生存获益仍然不佳。

而LY6G6D在MSS/MSI-L中的高表达及其在正常组织和其他肿瘤类型中的低表达使其成为治疗结直肠癌的潜力靶点。

01靶点概述

淋巴细胞抗原6家族成员G6D (LY6G6D)是位于6号染色体主要组织相容性复合体(MHC) III类区域的白细胞抗原簇。LY6G6D如大多数家族成员一样，通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定附着在细胞膜上。

TCGA RNA-seq数据分析发现，同正常结直肠组织相比，LY6G6D在原发性和转移性结直肠肿瘤组织中显著上调。LY6G6D在MSS和MSI-L结直肠癌中表达率高，在MSI-H结直肠癌中表达率相对较低，而正常组织和非结直肠癌肿瘤中LY6G6D表达极低。

此外，LY6G6D在正常前列腺组织中拷贝数最高，但显著低于结直肠肿瘤组织，中位nRPKM分别为0.898和8.431。

在结肠癌细胞系中，ERKs和STAT5在基础条件下的激活是负相关的。磷酸化STAT5在转移性细胞株(SW620)中表达水平最高，其特征是LY6G6D蛋白表达显著增强。而STAT5敲除后显著降低了LY6G6D水平，表明STAT5能调控LY6G6D表达。此外，以CD8+ T淋巴细胞减少和PD-1/PD-L1低表达为特征的MMR型癌症表现出LY6G6D表达和STAT5活化增强。

此外，另有研究发现在p38α沉默的HCTC116细胞中，LY6G6D的表达显著降低。这表明p38 MAPK也参与LY6G6D表达的调控。

LY6G6D的高水平表达与免疫抑制类型细胞的高度浸润相关，如调节性T细胞(Treg)和辅助性T细胞2(Th2)。此外，LY6G6D阳性的MSS细胞(SW620)能通过骨髓源性抑制细胞(MDSC)的扩增抑制T细胞增殖。尽管对其功能了解有限，但已有研究表明它可能在CRC中调控肿瘤生长和免疫逃避。LY6G6D在MSS CRC上的特异性表达使其成为基于抗体治疗的一个有潜力的靶点。

吉满生物根据市场需求和研究现状，推出构建LY6G6D过表达稳定细胞系/抗体的服务（详细数据见文末），可用于抗体筛选、表征、一致性评价, 充分满足药物研发的需求，助力抗体药物临床申报。

02新型LY6G6D/CD3双抗

LY6G6D作为继KRAS、HER2、EGFR、VEGF、GPA33等靶向结直肠癌的又一新兴靶点，目前开发的药物比较少，公开披露的仅Genentech开发的LY6G6D/CD3 T细胞依赖性双抗（TDB）。

LY6G6D-TDB，是抗LY6G6D和抗CD3E抗体使用 “knob-into-holes”技术组装成的全长IgG1双特异性抗体。在CHO细胞中进行重组表达，抗体在Fc含有突变(CH3 N297G)，进而减少与Fcγ受体的结合，从而减少Fc效应功能。

体外细胞毒性试验表明，CD3的高亲和力使靶细胞杀伤效能提高了26倍，T细胞活化效能提高了4倍。因此，为获得更好的LY6G6D-TDB活性而选择设计了高亲和力的CD3臂。

LY6G6D-TDB 对于不同LY6G6D表达水平的CRC细胞均有较好的细胞毒性，EC50值为7.11-19.49 ng/mL，而对LY6G6D-细胞系HEK293无细胞毒性。

同时，LY6G6D-TDB的作用依赖于LY6G6D的表达（A）和CD3+ T细胞的存在（B），只有当LY6G6D+ CBC细胞存在时才能诱导T细胞活化和细胞因子的分泌（D），同时T细胞活化也具有剂量依赖性（E-G）。

体内试验表明，LY6G6D-TDB单剂量和与PD-1联用均表现出显著的疗效。5 mg/kg和1 mg/kg的单剂量LY6G6D-TDB治疗（n=10），分别有9只和5只小鼠出现PR；与PD-1联用时，疗效更为显著，ORR达100%（C）。

LY6G6D-TDB对已建立的结直肠癌异种移植瘤的抗肿瘤效果表明，LY6G6D-TDB可以将免疫效应细胞定向到结直肠癌细胞附近并诱导抗肿瘤反应。

与其他被选为用于治疗结直肠癌的双特异性T细胞衔接剂的TAA (如P-cadherin和GUCY2C)相比，LY6G6D表现出“清洁”TAA的特征，在正常组织中表达有限，而在结直肠癌中表达升高，因此可能会降低"靶内、肿瘤外"毒性的风险。

在正常组织和肿瘤组织中差异表达如此之大的表面蛋白非常罕见，目前还没有靶向LY6G6D的其他治疗药物的报道。这些数据证明，靶向LY6G6D的新型T细胞结合双特异性抗体有可能为结直肠癌患者提供临床获益。

吉满生物科技（上海）有限公司，是位于上海浦东的一家以创新为驱动的工程化细胞系研发公司，基于自有的国内最大报告基因平台、慢病毒平台以及最迅速的药研网资讯平台，目前已构建出500余株现货单克隆细胞系产品，覆盖ROR1/DLL3/SLC39A6/TROP2/BCMA/BDCA/TREM2……200余新药热门靶点，其中有90余靶点开发有对应luciferase reporter方法，更有国内独家/首家CCR8, BDCA, TREM2和GAPR等luciferase的assay平台。

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