抗精子免疫性不育症动物模型【北京动物实验】

抗精子免疫性不育症动物模型【北京动物实验】

【造模机制】男性免疫不育症诊断上以不育男性的血清和精浆中发现抗精子抗体为依据。实验研究是以主动免疫法建立血清或生殖道局部抗精子抗体(AsAb)动物模型。

【造模方法】

1.动物和试剂 NIH 雄鼠。酶标仪、离心机。0.5%NP-40、生理盐水、考马斯亮蓝,弗氏佐剂、ELISA 试剂盒。

2.模型制备取常规检查正常的人精液 40 份,离心 30 分钟,弃精浆,精子用生理盐水洗涤5次,然后加入 0.5%NP-40,震荡 2 小时,离心 20 分钟,取上清液加生理盐水,4℃透析,适当浓缩后,行考马斯亮蓝法测定蛋白浓度。取 8 周龄 NIH 雄鼠,用上述提取的精子膜抗原伴弗氏完全佐剂,对小鼠进行腹腔免疫,每只小鼠注射抗原量为 100pug,2 周后用弗民不完全佐剂抗原加强免疫1 次,每只小鼠性射抗原量为 150μg,隔 1 周后以精子生理盐水抗原再加强免疫 1 次,每只小鼠注射抗原量为 150μg。

3.观察指标应用酶联免疫吸附法检测血清 AsAb。小鼠免疫前 ELISA 法测定血清AsAb,所有吸光值均接近 0。免疫后若 AsAb 测定结果为阳性,则造模成功。

【模型特点】小鼠免疫前 ELISA 法测定血清 AsAb,所有吸光值均接近0。免疫后(造模后)AsAb 测定结果为阳性。

【应用范围】以主动免疫法建立血清或生殖道局部 AsAb 动物模型,是进行中医药预防,治疗及其作用机制研究的主要方法。模型成功建立后,对小鼠灌胃给药数天。之后若发现血清 AsAb 的水平有显著下降,或出现阳转阴,则认为该药物有效。

【注意事项】不育的原因非常复杂,其中抗精子抗体是免疫性不育的主要原因。研究发现不育症中 20％～40％是由免疫原因引起的。抗精子抗体主要影响精子的活动,从而大大降低受孕的机会。因此,消除抗体和抑制抗体的产生,是治疗抗精子免疫性不育症的关键。

【模型评价】以主动免疫法建立血清或生殖道局部 AsAb 抗精子抗体动物模型是目前应用广泛的模型。实验操作简单,酶联免疫吸附检测效率高,造模的成功率也高。是较为理想的研究抗精子免疫性不育症的模型。

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