细菌转化实验原理、方法、材料、步骤

一、细菌转化实验实验方法原理：

细菌转化实验中质粒DNA粘附在细菌细胞的表面，并在42°C进行短时热休克处理，以促进DNA的吸收。然后将其在非选择性培养基中培养一代。质粒上携带的抗生素基因表达表达后，不含抗生素的培养基在培养基中生长。

二、细菌转换实验所需材料：
1.涡旋混合器

2.微量移液器采样器

3.移液器吸头

4.1.5ml微量离心管架

5.双面微量离心管架

6.干燥的恒温气浴（或恒温水浴）

7.制冰机

8.恒温摇床

9.培养皿（固体LB-Amp铺砌）

10.超净工作台

11.酒精灯

12.玻璃涂层棒

13.恒温培养箱。

14.培养基（不含抗生素）

15.LB培养基（含抗生素）

16.无菌ddH2O

17.IPTG

18.X-gal。
（注）准备：无菌ddH2O，将1.5ml离心管放入铝制饭盒中（灭菌），将移液器吸头插入相应的吸头盒中（灭菌），20％IPTG（M / V），2％X-gal（M / V，含N，N-二甲基甲酰胺）。

三、细菌转化实验操作步骤：
（1）预先将恒温水浴的温度调节至42°C。
（2）从-70°C超低温冰箱中取一管（100μl）合格细菌，立即用手指加热使其融化，然后将其插入冰，冰浴中5-10min。
（3）加入5μl连接的质粒混合物（DNA含量不超过100ng），轻轻摇动并置于冰上20分钟。
（4）轻轻摇动后，插入42°C水浴中1-2min进行热震，然后迅速将其放回冰中并静置3?5min。
（5）在超干净的工作台中，向上述每个试管中加入500μlLB培养基（不含抗生素），轻轻混合，然后将其固定在摇床上的弹簧架上，并在37°C摇动1h。
（6）在超净工作台上取上述转化混合物100-300μl，分别倒入含有合适抗生素的LB平皿中，用酒精灯燃烧的玻璃涂层棒要均匀涂覆（注意：玻璃涂层）熄灭棒上的酒精后，请稍等片刻，待冷却后再涂抹。
（7）如果载体和宿主细菌适合筛选蓝点和白点，则在滴加细菌溶液后，在平板上添加40μl2％X-gal和8μl20％IPTG，并用玻璃棒均匀地覆盖，酒精灯。 。
（8）标记带涂层的培养皿，将其置于37°C恒温培养箱中30-60min，直到表面上的液体渗透到培养基中，然后将其倒置并置于37°C恒温中保温箱过夜。
（9）在被细菌污染的台式机上喷洒70％的乙醇，干燥台式机，并写出实验报告。
（10）观察平板上生长的菌落克隆，只要可以将菌落彼此分离即可。注意白色斑块。