荧光标记系列：荧光标记多种外泌体（定制含步骤）

荧光标记外泌体

外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进肿瘤发生和转移等作用；此外，外泌体还可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。外泌体标记或示踪技术：对分离的外泌体进行体外标记或活体示踪。

将标记的外泌体加入受体细胞培养基中，与受体细胞进行共培养，观察细胞的功能变化，如细胞增殖、迁移与侵袭、细胞凋亡等；或者将外泌体注射入动物模型中，观察动物表型变化和检测动物相关指标。

制备荧光标记外泌体的步骤如下∶

1.取200 ug/ml的C5-马来酰亚-Alexa488(绿色荧光）或C5-马来酰亚-Alexa633(红色荧光)2.5 ul，加入提取好的含60- 100 ug蛋白质的30ul外泌体样品中，以PBS补足至50ul ,不搅拌的情况下于暗室中室温孵育60分钟。

⒉.在孵育时将exosome spin columns ( Invitrogen )试剂盒按照说明书准备好并将粉末树脂于室温下水合15-30分钟。

3.将装有柱子的收集管于离心机水平转子中以750x g离心2分钟，弃收集管，向树脂中加入荧光染料孵育后的外泌体

4.将柱子置于1.5ml微量离心管750x g离心3分钟，多余的染料会被树脂吸附

5.荧光标记后的外泌体缓慢加入1000ul不含酚红的DMEM，于0.22um过滤膜过滤后。分装并储存于负80度备用。

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