【维真生物-知识分享】慢病毒滴度测定（一）

慢病毒滴度测定（一）

整合数法标定无荧光慢病毒滴度

维真生物-市场部

1. 病毒感染细胞

① 感染前6 h在24孔板中以2.5×10E+5细胞/孔均匀接种HEK293细胞。

② 将慢病毒进行梯度稀释，共做3个梯度，即每孔（500μl 无双抗、无血清的DMEM培养基）中含10 μl、1 μl、0.1 μl 病毒，振荡混匀后加至接种好细胞的24孔板。

③ 感染 18-20h后，将培养板中的培养基更换为新鲜的DMEM完全培养基。

④感染 64-68h 后收集细胞并进行基因组DNA的提取。

2.基因组DNA qPCR检测

①  提取各孔细胞基因组DNA。

② 以被测慢病毒载体梯度稀释为标准品，慢病毒载体上的通用引物进行qPCR以获得病毒整合拷贝数。

③ 以Actin质粒梯度稀释为标准品，Actin引物进行qPCR检测样品的基因组拷贝数以得到基因组拷贝数。

3.计算慢病毒滴度IU/mL

IU/mL=(C×N×D×1000)/V

C：平均每基因组慢病毒整合拷贝数；

D：病毒稀释倍数；

N：感染时细胞数目（2.5×10E+5）；

V：加入稀释病毒的体积。