FITC标记抗体的保存-星戈瑞FITC-NHS/葡聚糖

FITC标记抗体之Marsshall法标记过程

需要材料：

抗体溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1%硫柳汞水溶液、三角烧瓶（25~50mL）、冰及冰槽（或1000mL烧杯）、电磁搅拌器、灭菌吸管、透吸袋、玻棒、棉线及烧杯（500mL）、pH7.2或pH8.0的0.01mol/L PBS等。

操作过程：

a.抗体的准备：取适量已知抗体浓度的溶液，置入三角烧瓶中，加入生理盐水及碳酸盐缓冲液，使最后抗体浓度为20mg/mL，缓冲液容量为总量的1/10，混匀，将三角烧瓶置冰槽中，电磁搅拌（速度适当以不起泡沫为宜）5~10min。

b.荧光素的准备：根据欲标记的蛋白总量，按每毫克蛋白加0.01mg荧光素，用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末。

c.标记：边搅拌边将称取的荧光色素渐渐加入抗体溶液中，避免将荧光素粘于三角瓶壁或搅拌玻璃棒上（大约5~10min内加完）。加毕后，继续搅拌12~18h。标记期间应保持蛋白溶液于4摄氏度冰箱或冰库中。

d.透析：标记完毕后，将标记的抗体溶液离心（2500rpm）20min，除去其中少量的沉淀物，装入透吸袋中后再置于烧杯中，用pH8.0缓冲盐水透析（0~4摄氏度）过液。

e.过柱：取透析过液的标记物，过Focudex G-25或者Focudex G-50进行系体置换，然后分装、贮存于4摄氏度冰箱或冰库中。

FITC标记抗体的保存

以4摄氏度或-20摄氏度低温保存，防止抗体活性降低和蛋白质变性。最好加入浓度为（1:5000）~（1:10000）的硫柳汞或（1：1000）~（1:5000）的叠氮钠防腐，小量分装如0.1~1mL，真空干燥后更易长期保存。

星戈瑞stargraydye分享科研用材料。（2022.2）