蛋白TAG“千千万”，哪个才是你蛋白的最佳拍档?
蛋白标签（Protein tag）技术是指利用基因克隆手段，将具有特定功能的多肽、蛋白质结构域，甚至完整蛋白质与目标蛋白融合在一起，以实现目标蛋白的表达纯化，检测和示踪等应用的技术。蛋白标签融合是当下最常用的蛋白质研究技术之一。目前应用比较成熟的蛋白标签不在少数，如何从众多TAG中挑出适合目的蛋白的最佳拍档是研究者的必做功课，本期干货汉恒小编为大家带来了目前常用的几种蛋白TAG介绍及构建和检测过程中的常见问题解答，希望能对大家的研究有所帮助。
常用的蛋白标签有6xHIS、Flag、c-Myc、HA、SUMO等。TAG性质会导致用途稍有差异，建议根据实验目的选择不同的性质蛋白标签。
Flag
氨基酸序列：DYKDDDDK，分子量：1012.95g/mol；Flag标签的优势：
1.融合FLAG的目的蛋白可直接通过非变性亲和层析纯化得到有活性的融合蛋白；2.可以被抗FLAG的抗体识别，可用于Western Blot（首选）、ELISA、免疫沉淀及免疫荧光等实验。
3.融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），得到特异的目的蛋白。已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。
目前除了Flag标签，还有3Flag标签。与Flag相比，3Flag的融合蛋白在检测时表现出更好的灵敏性：
3Flag第一种形式：DYKDDDDKGDYKDDDDKIDYKDDDDK，分子量：3173.09g/mol；
3Flag第二种形式：DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK，分子量：2730.79 g/mol；
3Flag第三种形式：DYKDDDDKDYKDDDDKDYKDDDDK，分子量：3002.98 g/mol。
6xHis
His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者常用于纯化包涵体蛋白；也可用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体；可和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。主要用于对重组蛋白进行分离纯化。
HA
HA标签蛋白，标签序列YPYDVPDYA，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，对外源靶蛋白的空间结构影响小，容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。可用于蛋白纯化、ELISA、免疫沉淀，常用于Anti－HA抗体检测和ELISA检测。
c-Myc
C-Myc 标签蛋白，含11个氨基酸，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。已成功应用在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀、免疫荧光和流式细胞计量术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。
SUMO
SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白，研究发现SUMO可以作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣，不但可以进一步提高融合蛋白的表达量，且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠，提高重组蛋白可溶性等功能。SUMO标签也常用于和其他标签一起应用，作为特异酶切水解位点。
Q&A:
蛋白标签是加在N端还是C端呢？
N-端或C-端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。分子量太小容易被降解的和比较难表达的蛋白，可以利用5’端的蛋白标签，可在一定程度上保证蛋白的稳定性，适用于表位筛选。若目的蛋白是分泌蛋白，分泌至高尔基体的过程中，蛋白5’端的信号肽会被酶切掉，这种情况就建议将标签放在C端。
加长标签与正常长度的标签有什么区别，检测时有什么区别？
主要是为了避免蛋白末端会被折叠到蛋白内部，或者被其他结合蛋白所遮蔽导致无法检测的情况。例如，更长的FLAG更有利于抗体结合表位的暴露，从而被抗体所结合。对常用的FLAG抗体来说，这几种不同形式的Flag标签并无区别，都可以识别。
检测标签不能用于纯化吗？
检测标签、纯化标签、示踪标签，在功能上没有绝对的界限，所有的检测标签也可以用于纯化，只不过需要先制备对应的抗体固定到纯化基质上。
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