蛋白质等电点测定 毛细管电泳

蛋白质表面存在一些侧链离子基团，如氨基、羧基、酚基、巯基等酸碱性基团，因此蛋白质和氨基酸一样本身带有净电荷。在不同pH的溶液中解离所带的正负电荷不同，当蛋白质解离的正负电荷相等时，这时的pH值就称为蛋白的等电点（isoelectric point，pI）。蛋白质的等电点与其空间结构有关，因此对于某一特定蛋白质来说其等电点也是固定的。

当蛋白质处于与其等电点相同pH的溶液中时，在该溶液中的溶解度最小，可以从溶液中沉淀出来，故蛋白质等电点常用于蛋白质的分离和提纯。常用的蛋白质等电点测定方法主要有传统的沉淀法、分光光度法和等电聚焦法等，基于毛细管电泳的等电聚焦法凭借其耗时短、精确度高以及样本用量少等优点已成为等电点测定的强有力工具。毛细管等电聚焦法利用蛋白质在等电点时净电荷为零的原理将待测蛋白质在特殊的缓冲液中进行聚丙烯凝胶电泳，这种特殊的缓冲液为两性电解质，可以在凝胶内形成连续的pH梯度，当电泳完毕时，蛋白质迁移到的位置对应的pH就是该蛋白质的等电点。