肾小球硬化性肾病动物模型【疾病动物模型外包】

肾小球硬化性肾病动物模型【疾病动物模型外包】

【造模机制】多柔比星可使肾小球毛细血管内皮细胞和足细胞肿胀,足突融合消失,基底膜增厚,动物表现蛋白尿、高脂血症,低蛋白血症,氦质血症,肾功能低下,有发展成类似人类慢性硬化性肾病的趋势。单侧肾切除,可导致肾小球局灶、节段性硬化。采用单侧肾切除并高低剂量多柔比星尾静脉注射造模,可复制成典型肾小球硬化性肾病。

【造模方法】

1.动物及分组选用 SPF 级 SD 雄性大鼠,体重(200±20)g,适应性饲养 1 周后随机分组。

2.模型制备造模组动物在麻醉下,行无菌手术摘除左肾,术后再将动物随机分成 A,B两组,A 组第 8天尾静脉注射多柔比星(深圳万乐药业有限公司产品)5mg/kg,第 35 天尾静脉注射生理盐水 0.5ml;B 组第 8 天尾静脉注射多柔比星 3mg/kg,第 35 天第 2 次尾静脉注射多柔比星 2mg/kg。

3.样本采集和指标测定于第 8 周末处死大鼠后,速取右肾少许肾组织作电镜样本,剩余肾组织自肾门处切成两片做病理组织切片,光镜观察肾小球和肾小管间质病理形态学改变,电镜下观察肾小球、肾小管间质超微结构变化。其他实验室检查:代谢笼收集 24 小时尿(注射前,注射后第 4.8 周末),测尿量和尿蛋白定量。后眼眶静脉丛采血(时间点同尿样本),用 SYNCHRON CX-7 全自动系列化分析仪;BECKMEN 公司试剂盒测定尿素氮,肌酐、总蛋白、白蛋白、胆固醇、甘油三酯。采用 HPIAS-2000 高清晰度彩色图文病理分析系统软件进行病理图像分析。每份标本至少计数 30 个肾小球,观察毛细血管开放直径,肾小球硬化指数、基质增殖面积比。进行统计学分析。

【造模特点】第 8 周时高低剂量多柔比星模型组均出现尿蛋白排出增加,血脂升高,肾功能下降;高剂量多柔比星注射组光镜下肾小球硬化达 80%以上,呈弥漫性,其中 25％～50％呈球性硬化,肾小球脏层上皮细胞足突广泛融合或消失;肾小管病变严重,肾小管上皮细胞肿胀,颗粒变性,坏死甚至脱落入小管腔,可见大量蛋白管型;间质纤维化和大量炎症细胞浸润;低剂量多柔比星注射组肾小球硬化呈局灶,节段性分布,肾小球肥大,肾小囊扩张,约50%肾小球有不同程度的硬化,球性硬化达 10%左右,间质可见明显纤维化和局灶性炎症细胞。结论:多柔比星对肾小球脏层上皮细胞、毛细血管内皮细胞及肾小管上皮细胞均有明显毒性损伤;高低剂量多柔比星注射组均为病变稳定的肾小球硬化模型,其中高剂量多柔比星注射组肾小球硬化模型为中晚期病理改变;低剂量多柔比星注射组为肾小球硬化早期病理改变。

【应用范围】研究肾小球硬化性肾病的发病机制和治疗方法。探讨该类疾病发生发展规律,病理演变过程,将其分为肾小球肥大期、系膜硬化期、血管腔闭塞期。

【注意事项】

1.选择肾切除的时机应在注射多柔比星之前在注射多柔比星之后摘除肾脏,易增加动物死亡率。2.单侧肾切除宜采用背部切口如采用腹部切口,大鼠死亡率高于背部切口。死亡原因多为腹腔感染引起的肠坏死和肠梗阻、肠胀气。

3.国产多柔比星与进口多柔比星的细胞毒作用有差别在剂量上应注意调整,以保证造模成功。文献报道国产多柔比星主要有深圳万乐药业公司产品和上海华联制药有限公司产品,进口多柔比星主要有日本制药株式分社产品、意大利爱宝大药厂产品等,国产多柔比星较进口多柔比星对肾脏毒性作用强,造模注射剂量应适当调整。如张悦等用一次性注射多柔比星(由意大利爱宝大药厂生产)溶液 7. 5mg/kg 制作微小病变型肾病模型,第 7 周时可见个别大鼠出现肾小球基底膜断裂,节段性硬化;而国产多柔比星通常用量在 5mg/kg 内即可在相同时间内出现肾小球硬化。

4.尾静脉注射时应准确多柔比星渗出静脉外侧,大鼠尾巴有腐烂现象。

5.造模前后不宜采血应与造模时间隔开,避免对大鼠的集中损伤,增加死亡率。

【模型评估】肾小球硬化是各种肾小球病变发展至终末期的一种不可逆的病理改变,是肾衰竭的主要病理基础,初期表现为局灶节段性,后期则表现为弥漫性球状分布。目前使用的肾小球硬化的动物模型主要有次全肾切除,肾动脉结扎外科模型,多柔比星、嘌呤霉素、柔红霉素等药物模型。多柔比星所致的肾小球硬化动物模型为稳定的肾小球硬化模型,具有慢性进展性肾损害的特点,与人类进行性肾脏疾病的表现非常相似,优于其他肾小球硬化动物模型。

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