Hepa1-6小鼠肝癌细胞培养攻略

2023-08-25 13:32 作者:Cas9X海星生物 0人读过 | 我要投稿

Hepa1-6细胞是C57/L小鼠肝癌细胞系Hepa-1的衍生系。Hepa1-6细胞细胞表达白蛋白、甲胎蛋白（AFP）、α1抗胰蛋白酶、淀粉酶基因，经检测鼠痘病毒阴性。Hepa1-6细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究，也是一种合适的转染宿主。

此细胞可以在无血清的培养基中繁殖，培养基成分是：DMEM,75%;Waymouth＇sMAB87/3培养基，25%。添加3x10-8M硒。

Hepa1-6细胞基本信息

细胞名称：小鼠肝癌细胞

细胞别称：HEPA 1-6; Hepa-1-6; Hepa1-6

产品货号：TCM-C734

种属来源：小鼠

组织来源：肝

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S

传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次

传代周期：48-72 h

培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

参考文献："Darlington GJ. Liver cell lines. Methods Enzymol. 151: 19-38, 1987. PubMed: 3431441Darlington GJ, et al. Expression of liver phenotypes in cultured mouse hepatoma cells. J. Natl. Cancer Inst. 64: 809-819, 1980. PubMed: 6102619"

Hepa1-6细胞复苏

推荐使用海星生物Hepa1-6细胞配套专用培养基
货号：TCM-C734

(1) 开启37℃水浴锅。预热完全培养基，提前将细胞从液氮中取出，放于-80℃冰箱，让冻存管中液氮挥发。(2) 洁净工作台内准备15 mL离心管，加入5 mL预热的完全培养基。(3) 从-80℃冰箱中取出细胞。快速将冻存管置于37℃水浴锅内，快速晃动，使冻存液迅速融化。注意: ① 融化过程必须晃动冻存管，保证冻存液融化均匀。晃动时应避免水没过管盖增加污染风险。

② 管内冻存液融化至只剩一个约2mm直径的冰晶时，可停止水浴。继续晃动冻存管至冰晶融化。

(4) 用75%酒精消毒冻存管表面。在洁净工作台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至预先准备的离心管内。用少量完全培养基洗涤冻存管1~2次，一并收集至离心管内。

(5) 250 g离心4 min。离心后去除上清。加入2 mL完全培养基，轻柔吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。（如有台盼蓝可取少量细胞悬液进行染色计数）

(6) 将细胞平均接种到1个T25培养瓶或底面积相当的培养容器中，加入足量完全培养基，摇匀细胞，将培养容器放入培养箱中培养。

注意: 整个细胞复苏过程在尽可能5-10min内完成。

(7) 复苏次日，观察细胞状态并换液。

注意: 细胞接种24 h内不应扰动。

Hepa1-6细胞传代

细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。(推荐传代比例1:2-1:4，首次传代建议1:2)

(1) 准备离心管、培养瓶以及无菌枪头等，提前预热完全培养基、胰酶、PBS。

细胞完全培养基(货号TCM-C734)胰酶 0.25% Trypsin-0.04% EDTA（货号: GUTP-R001，以下简称）

1×PBS（货号: GUPB-R001，以下简称PBS）

(2) 抽走培养瓶内培养基，加5mL PBS润洗1-2遍，清除残留培养基。

(3) 尽量吸干润洗的PBS后加1mL胰酶，摇晃使胰酶均匀覆盖瓶底，放置培养箱37℃消化。

(4) 消化时每隔1min拿出来观察，镜下可见细胞明显回缩，轻拍培养瓶部分细胞开始脱落时立即加入3-4mL含血清的培养基终止消化，吹落贴壁的细胞。

注意: 控制吹打力度轻柔，吹打次数不可过多，避免机械损伤

(5) 将细胞悬液转移至离心管中，1000rpm，3min离心收集细胞。

(6) 在新的培养瓶中加入适量新鲜培养基；（T25推荐5mL，T75推荐10-15mL）。

(7) 离心完成后，弃上清，加入适量新鲜培养基轻轻重悬吹散细胞，将细胞悬液均匀接种至培养瓶中，十字法或8字法混匀，然后放入培养箱中继续培养，注意培养瓶盖透气。

Hepa1-6细胞冻存

推荐使用海星一步冻存液（即用型、无血清、无需程序降温）
货号：GUCP-R201

(1) 待细胞生长至可传代的密度，即可准备冻存。(2) 消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心4 min。(3) 离心后去除上清，用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×10^6个/mL。注意: 细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞的状态。如离心后用冻存液重悬计数，请将细胞放置于4℃冰箱内，以减弱细胞代谢，较好的保持细胞状态。(4) 如使用海星一步冻存液，冻存管直接竖直放入-80℃冰箱即可完成“一步”冻存。如使用程序冻存液，需将冻存管放入提前预冷的程序降温盒后放入-80℃冰箱。(5) 24小时后可将冻存管转移到液氮进行长期保存。注意: 细胞不可长期保存在-80℃冰箱中。建议24 h后尽快转移至液氮中。